Fast LC/MS/MS Method for Quantitative Determination of Omeprazole in Human Plasma

Význam tématu

Omeprazol je jedním z nejrozšířenějších inhibitorů protonové pumpy využívaných v klinické praxi k léčbě gastroezofageálního refluxu, peptického vředu a dyspepsie. Přesná a citlivá kvantifikace jeho koncentrace v lidské plazmě je nezbytná pro farmakokinetické studie, terapeutický monitoring a zajištění kvality analytických laboratoří.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout rychlou, citlivou a robustní LC–MS/MS metodu pro kvantitativní stanovení omeprazolu v lidské plazmě s využitím UHPLC systému Nexera spojeného s triple kvadrupólovým hmotnostním spektrometrem LCMS-8040. Interním standardem byl tolbutamid.

Použitá metodika a instrumentace

• Vzorky plazmy byly připraveny jednoduchou extrakcí kapalina–kapalina: přidán byl zásaditý roztok NaHCO3 (pH 10,5), extrahováno ethylacetátem, odseparována organická fáze a po ředění acetonitrilem injektována do LC–MS/MS.
• Chromatografie proběhla na kolonce Capcell pak C18 (50×2,0 mm, 3 µm) s gradientním pohybem fáze B (acetonitril:methanol 50:50) vůči 0,02 M formiátu amonného ve vodě (pH 3,0) při průtoku 0,8 mL/min.
• Detekce byla realizována v režimu MRM (pozitivní ionizace pro omeprazol, negativní pro tolbutamid) s přechody m/z 346→198,1 a m/z 269→170,1.

Použitá instrumentace

• UHPLC Nexera, Shimadzu
• Hmotnostní spektrometr LCMS-8040, Triple Quadrupole, Shimadzu
• Funkce Synchronized Survey Scan pro optimalizaci kolizních parametrů

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda dosáhla dolní meze kvantifikace (LLOQ) 1,0 ng/mL při koeficientu variačním <20 %. Kalibrační křivka v rozmezí 1–2000 ng/mL byla lineární s R² = 0,99987. Preciznost (CV) QC vzorků se pohybovala mezi 3,1 a 12,4 %, s přesností 80,0–113,3 %. Obnova omeprazolu z plazmy byla v rozmezí 86,0–114,4 %, což potvrzuje účinnou extrakci a minimální matriceové interference.

Přínosy a praktické využití metody

Rychlost analýzy (< 4 minuty) a nízká spotřeba biologického vzorku (180 µL) umožňují vysoký pracovní výkon v bioanalytických laboratořích. Metoda je vhodná pro farmakokinetické studie, terapeutický monitoring a QC rutinních analýz omeprazolu i podobných látek.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření metodiky na multikomponentní stanovení inhibitorů protonové pumpy v jedné analýze.
• Integrace automatizované přípravy vzorku pro vyšší propustnost.
• Vývoj miniaturizovaných LC–MS/MS systémů pro point-of-care testování.

Závěr

Prezentovaná LC–MS/MS metoda pro stanovení omeprazolu v lidské plazmě je rychlá, citlivá a reprodukovatelná. Dosahuje požadované citlivosti i přesnosti a je plně použitelná pro farmakokinetické a klinicko-monitorovací aplikace.

Reference

• J. De Smet et al. J. Sep. Sci. 2010, 33, 939–947