Rapid Detection of Growth Hormone-Releasing Peptides in Dried Blood Spots: a Proof of Concept Workflow for Anti-Doping Analysis

Význam tématu

Detekce růstových hormon-uvolňujících peptidů (GHRP) v sušených kapkách krve (DBS) přináší revoluční přístup v protidopingové analýze. Díky malému objemu vzorku, dlouhodobé stabilitě a minimalizovanému riziku kontaminace DBS usnadňují screening zakázaných látek v terénu i laboratoři.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout a ověřit workflow pro rychlou, citlivou a reprodukovatelnou detekci peptidu ipamorelinu v DBS. Autoři předložili důkaz konceptu využívající samostatnou akvizici dat (IDA) na systému SCIEX X500R QTOF.

Použitá metodika a instrumentace

• DBS karty conditioning: 0,5 M kyselina citronová, sušení 1 h.
• Extrahční protokol 10 kroků: protein saver karta, acetonitril/voda 50:50 s 10 % formiátem, centrifugace, třepání.
• UHPLC separace: Phenomenex C18 kolona 100×2,1 mm, částice 1,7 μm, teplota 40 °C, průtok 0,5 mL/min, doba 7 min.
• Mass spectrometry: SCIEX X500R QTOF v režimu ESI pozitivní ionizace, TOF MS sken 230–800 Da, TOF MS/MS 50–720 Da, Independent Data Acquisition.
• Data processing: SCIEX OS Software 1.5.

Hlavní výsledky a diskuse

• LOD a LOQ pro ipamorelin v DBS: 2,5 ng/mL resp. 5 ng/mL.
• Lineárita kalibrace 5–100 ng/mL: R2 > 0,99.
• Mezi- a vnitrodenní přesnost a přesnost: bias < 20 %, CV < 25 % (výjimka intra-day CV na LOQ 32,7 %).
• Reprodukovatelné MS/MS spektra tří hlavních fragmentů (129,1022; 223,1189; 420,2030 Da) během tří dnů.

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlá a snadno implementovatelná příprava vzorku z DBS.
• Vysoká citlivost a selektivita detekce zakázaných peptidů.
• Možnost rozšíření panelu o další GHRP dle WADA listu.
• Využití v terénních podmínkách i centralizovaných laboratořích pro dopingový monitoring.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Integrace DBS workflow do mobilních testovacích jednotek pro rychlý screening sportovců.
• Rozšíření metody o multiplexní detekci více zakázaných peptidů současně.
• Využití pokročilých algoritmů machine learning pro automatizovanou interpretaci MS/MS dat.
• Adaptace metody pro monitorování terapeutického použití GHRP v klinické praxi.

Závěr

Prezentované workflow pro detekci ipamorelinu v DBS pomocí SCIEX X500R QTOF nabízí rychlý, citlivý a spolehlivý přístup v boji proti dopingu. Kombinace jednoduché extrakce a kvalitní IDA akvizice dat zajišťuje vysokou reprodukovatelnost a možnost rozšíření na další zakázané peptidy.

Reference

• Ve studii nejsou uvedeny další literární zdroje