Direct quantitation of five immunosuppressant drugs in volume-controlled dried whole blood spots by a fully automated Transcend DSX-1 system

Význam tématu

Důsledné sledování hladin imunosupresivních léčiv v krve je pro příjemce transplantátů zásadní. Nízké koncentrace mohou vést k odmítnutí štěpu, zatímco vysoké množství zvyšuje riziko toxicity. Analýza drobných krví nasáklých skvrn (dried blood spots, DBS) nabízí minimálně invazivní odběr, snadné skladování a přepravu i dlouhodobou stabilitu analyzovaných látek.

Cíle a přehled studie

Cílem popsané práce bylo ověřit plně automatizovaný proces kvantifikace pěti hlavních imunosupresivních léčiv (cyklosporin A, everolimus, mykofenolová kyselina, sirolimus, takrolimus) z objemově řízených DBS pomocí systému Transcend DSX-1 propojeného s 2D-LC-MS/MS.

Použitá metodika a instrumentace

Pracovní postup je zcela online a kombinuje tyto kroky:

• Objemově řízený odběr 10 µL kapky krve pomocí karty HemaXis DB10.
• Automatizovaná extrakce celého DBS modulem DSM se flow-through desorpční technologií FTD™.
• Online čištění vzorku technologií TurboFlow™ v 2D-UHPLC (Cyclone-P TurboFlow kolona a Hypersil GOLD C8 analytická kolona).
• Detekce za použití triple kvadrupólové hmotnostní spektrometrie TSQ Altis™ Plus se zdrojem HESI a SRM režimem.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda dosahuje doby analýzy 5 minut na vzorek. Detekční limity (LOD) a kvantifikační limity (LOQ) se pohybují v nízkých jednotkách ng/mL, lineární rozsah až do 1 600 ng/mL pro cyklosporin A a mykofenolovou kyselinu, s R2 > 0,99 pro všechny analyty. Reprodukovatelnost interních standardů u všech vzorků je pod 9 % RSD, přesnost kvantifikace v rámci ±15 %.

Přínosy a praktické využití metody

Plně automatizované zpracování DBS přináší rychlost, minimalizaci chyb při ručním odběru a přípravě vzorků, bezpečné zachování řetězce evidence díky obrazu spotu před a po extrakci a vysokou reproducibilitu. Metoda je vhodná pro klinická výzkumná centra, laboratoře TDM a decentralizované odběry v terénu.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další rozvoj může směřovat k rozšíření panelu sledovaných léčiv a metabolitů, integraci umělé inteligence pro automatickou kontrolu kvality vzorku nebo miniaturizaci odběrových zařízení pro širší home-care aplikace. Možnosti kombinace s mikrodialýzou či mikrofluidními systémy otevřou dveře k on-line monitorování farmakokinetiky.

Závěr

Popisovaná studie potvrzuje, že objemově kontrolované DBS ve spojení s plně automatizovanou 2D-LC-MS/MS nabízejí rychlý, spolehlivý a citlivý postup pro terapeutické monitorování imunosupresiv. Technologie Transcend DSX-1 a TurboFlow výrazně zkracují čas přípravy a minimalizují manuální zásahy, což zvyšuje efektivitu a kvalitu výsledků.

Reference

1. Wu I. et al. Fully automated dried spot analysis for tramadol and metabolites. Thermo Fisher Scientific Technical Note 000625, 2021.
2. Dollard S.C. et al. Sensitivity of dried blood spot testing for congenital cytomegalovirus detection. JAMA Pediatr. 2021, 175(3), e205441.
3. Guo J. et al. Direct quantitation of phosphatidylethanol in volume-controlled dried whole blood spots. Thermo Fisher Scientific Technical Note 000301, 2022.