Column screening for oligonucleotide analysis and quality control

Význam tématu

Oligonukleotidy jsou nezbytné pro moderní biotechnologický a farmaceutický výzkum, zejména v oblasti diagnostiky, terapií a vakcín. Kvalitní a reprodukovatelná chromatografická analýza je klíčová pro kontrolu čistoty a identity těchto molekul, což zajišťuje bezpečnost a účinnost finálních produktů.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo porovnat dvě reverzně-fázové kolonové náplně optimalizované pro iontově-párovou chromatografii (IP-RP) oligonukleotidů. Testovány byly kolony KNAUER Sepapure oliGO a Waters XBridge BEH oligonucleotide. Analýza zahrnovala hrubé produkty (43mer, dT18 linker), čištěné intermediáty a finální thiolátový 43mer.

Použitá metodika a instrumentace

Veškerá měření probíhala za IP-RP podmínek s UV detekcí při 260 nm. Iontově-párovací činidlo maskuje náboj oligonukleotidu, což umožňuje jeho retenci na klasické C18 fázi. Instrumentace:

• HPLC systém KNAUER
• Kolona KNAUER Sepapure oliGO, 50 × 4,6 mm ID
• Kolona Waters XBridge BEH oligonucleotide, rozměry obdobné

Hlavní výsledky a diskuse

Obě kolony prokázaly srovnatelnou retenci, symetrii píků a opakovatelnost. Kolona KNAUER vykázala o něco lepší separaci laterálních nečistot (ostřejší rameno špičky) a mírně odlišné retenční časy, což lze připsat rozdílům v chemické povaze stacionární fáze a velikosti pórů. Čistoty měřených vzorků byly v souladu s předchozími výsledky BianoGMP.

Přínosy a praktické využití metody

IP-RP HPLC s uvedenými kolonami nabízí robustní nástroj pro rutinní QC oligonukleotidů. KNAUER Sepapure oliGO představuje plnohodnotnou alternativu k běžně používaným kolónám konkurence a zajišťuje spolehlivou analýzu hrubých směsí i finálních produktů.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozvoj stacionárních fází s vyšší odolností vůči extrémním pH a teplotám, miniaturizace systému pro mikroprůtoky a integrace MS detekce pro podrobnější charakterizaci modifikovaných oligonukleotidů. Dále bude růst automatizace a vysokoprůchodových testů, které urychlí vývoj terapeutických nukleotidů.

Závěr

Prováděné srovnání potvrdilo, že KNAUER Sepapure oliGO kolona přináší výsledky srovnatelné s komerčními alternativami a nabízí výhody v oblasti rozlišení nečistot. Tato metoda je vhodná pro rutinní kontrolu kvality oligonukleotidů ve výzkumných i průmyslových laboratořích.

Reference

Kramer J., Schneider N., Folmert K., Schäk M. Column screening for oligonucleotide analysis and quality control. KNAUER Wissenschaftliche Geräte GmbH, 2025.