Migrating Methods from the ACQUITY™ UPLC™ “Classic” System to the ACQUITY Premier System (FL)

Význam tématu

Lifecycle management analytických metod je klíčový pro zajištění bezpečnosti a kvality léčiv. Migrace existujících metod na moderní chromatografické systémy přináší rychlejší a spolehlivější výsledky, zvyšuje reprodukovatelnost analýz a rozšiřuje možnosti detekce kritických vlastností biotherapeutik. Systém ACQUITY Premier s povrchy MaxPeak HPS minimalizuje adsorpci analyzátů a špičkové zkreslení, což podporuje přesnější charakterizaci posttranslačních modifikací bílkovin.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo ověřit, zda je možné bez úprav metody přenést peptide mapping monoklonální protilátky ze systému ACQUITY UPLC Classic na nový ACQUITY Premier s pevnou smyčkou. Současně se hodnotily výhody povrchové technologie MaxPeak HPS na redukci špičkových artefaktů a zvýšení recovery.

Použitá metodika a instrumentace

• Vzorky: mAb Tryptic Digestion Standard rozpuštěný v roztoku formiové kyseliny.
• Kapalinová chromatografie: ACQUITY Premier System (BSM-FL) a ACQUITY UPLC Classic.
• Detekce UV: ACQUITY TUV při vlnové délce 214 nm.
• Kolony: CSH C18, 2,1 × 100 mm, 1,7 µm; verze s MaxPeak HPS a standardní verze.
• Mass detector: ACQUITY QDa ve skenovacím režimu 350–1250 m/z.
• Software: Empower 3 pro řízení a zpracování dat.

Hlavní výsledky a diskuse

Análisis se stejnou metodou a gradientem prokázaly téměř identické zadržovací časy mezi systémy, s rozdílem menším než 10 µL ve dvojném objemu. Porovnání 22 peptidových špiček potvrdilo shodu selektivity i plochy špiček s rozdíly do 0,5 procenta. Při použití kolony s povrchem MaxPeak HPS se u čtyř peptidů bohatých na kyselé aminokyseliny prokázalo výrazné snížení špičkového tailingu a lepší recovery, přičemž vysoce polární fragment LT14 byl detekovatelný jen na HPS verzi. Snížení tailingu native formy kritického peptidu o 70 procent umožnilo odhalit deamidovanou impuritu.

Přínosy a praktické využití metody

• Zajištění bezeztrátové migrace starších metod bez úprav parametrů.
• Zvýšení citlivosti a přesnosti charakterizace posttranslačních modifikací.
• Vylepšená recovery kovově citlivých analyzátů a snížení chromatografických artefaktů.
• Možnost širšího nasazení v rutinní kontrole kvality biopharmaceuticals.

Budoucí trendy a možnosti využití

Systémy s aktivními povrchy HPS budou nacházet uplatnění v dalších aplikacích vyžadujících minimalizaci adsorpce, například při analýze peptidů s kovovou afinitou, polymorfních variant bílkovin nebo při ultra-sledování stopových komponent. Další vývoj může zahrnovat optimalizaci povrchových chemistr a rozšíření kompatibility s širokou škálou sloučenin.

Závěr

Migrace peptide mappingu z ACQUITY UPLC Classic na ACQUITY Premier se systémem MaxPeak HPS proběhla hladce bez úprav metody. Nová platforma poskytuje ekvivalentní zadržovací časy a reprodukovatelnost dat spolu s významným snížením špičkového tailingu a zvýšením recovery kyselých peptidů. Tyto vlastnosti přispívají k lepšímu řízení životního cyklu bioterapeutik a zvyšují kvalitu analytických výsledků.

Reference

• Guidance for industry Q10 pharmaceutical quality system. ICH, 2009.
• Bigos P., Birdsall R., Yu Y. Obtaining Equivalent IEX Chromatographic Performance Through Automated Method Scaling Using Waters Column Calculator. Waters Application Note 720007807, 2022.
• Chelius D., Rehder D. S., Bondarenko P. V. Identification and Characterization of Deamidation Sites in the Conserved Regions of Human Immunoglobulin Gamma Antibodies. Anal. Chem. 77: 6004, 2005.