Method Scaling from ACQUITY™ Premier to Arc™ Premier System

Význam tématu

Peptidové mapování je klíčovou metodou pro charakterizaci monoklonálních protilátek a zajištění konzistence biotechnologických produktů. Při migraci metod mezi různými chromatografickými platformami hraje roli zachování separačního profilu a kvantitativní reprodukovatelnosti.

Cíle a přehled studie

Studie ukazuje použití Waters Columns Calculator pro automatické škálování peptidové mapy infliximabu mezi systémem ACQUITY™ Premier (UPLC) a Arc™ Premier (UHPLC). Hodnotí se zachování selektivity, rovnováha hmoty a reprodukovatelnost retencí a ploch špiček.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorek infliximabu byl redukován, alkylován, trypticky štěpen a připraven v mobilní fázi. Škálování gradientu vycházel z výpočtů sloupcových objemů a objemů mrtvého prostoru obou systémů. Jako detektory sloužily UV absorbance (214 nm) a ACQUITY™ QDa hmotnostní detektor.

Použitá instrumentace

• ACQUITY™ Premier UPLC System s TUV detektorem
• Arc™ Premier UHPLC System s TUV detektorem
• ACQUITY™ QDa Mass Detector
• QuanRecovery™ vials s MaxPeak™ HPS povrchy
• ACQUITY™ Premier Peptide CSH™ C18 kolona (1.7 µm, 2.1×100 mm)
• XSelect™ Premier Peptide CSH C18 kolona (2.5 µm, 4.6×100 mm)
• Empower™ 3 software

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda škálovaná s „scale“ volbou prodloužila běh na ~120 min při zachování relativních retenčních časů (RRT < 0.02) a odchylek SD < 0.01 min. Při „custom“ režimu s flow 0,96 mL/min byl běh udržován na 80 min s obdobnou selektivitou. QDa detektor poskytl stabilní plošné odpovědi (% RSD < 5 %). MaxPeak HPS povrchy významně snížily špičkové protáčení, až o 60 %, a umožnily detekci nízce abundantních deamidovaných forem peptidu HC-T38.

Přínosy a praktické využití metody

Automatizované škálování metod urychluje transfer mezi laboratořemi a minimalizuje laboratorní ladění. Robustní povrchy HPS zvyšují spolehlivost detekce kovově citlivých peptidů a zabraňují adsorpci.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se širší aplikace automatického škálování v bioprodukci a QA/QC. Integrace pokročilých softwarových nástrojů s podporou AI pro optimalizaci gradientů a detekční profilace rozšíří možnosti vysokoprůtokových i vysokozátěžových analýz.

Závěr

Metoda převedená ze systému ACQUITY™ Premier na Arc™ Premier zachovává selektivitu i kvantitativní přesnost. Waters Columns Calculator a MaxPeak HPS technologie společně zajišťují rychlou a robustní implementaci peptide mappingu v různých pracovních prostředích.

Reference

1. R. E. Birdsall et al. Migration of an HILIC Method…Waters Application Note, 2021.
2. K. DeLaney et al. Improving Peptide Mapping Studies…Waters Application Note, 2022.
3. P. Bigos et al. Obtaining Equivalent IEX Performance…Waters Application Note, 2022.