Enabling Routine and Reproducible Intact Mass Analysis When Data Integrity Matters

Význam tématu

Massová spektrometrie intaktních bioterapeutických proteinů je klíčová pro ověření sekvenční integrity, detekci produktových variant a podporu regulačních procesů. Metoda umožňuje rychlou a přesnou analýzu intact proteinu i jeho subjednotek, což je zásadní pro zajištění kvality a konzistence bioterapeutik v průběhu vývoje a ve výrobě.

Cíle a přehled studie

Cílem této studie bylo demonstrovat výkonnost integrovaného workflow pro analýzu intact mass pomocí systému BioAccord, který poskytuje automatizovanou akvizici, zpracování dat a reporting vhodný pro regulovaná prostředí. Studie se zaměřila na analýzu intact monoklonální protilátky a jejích IdeS subjednotek, s cílem ověřit reprodukovatelnost a kvalitu dat.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky:

• Intakt mAb Mass Check Standard: koncentrace 0,2 µg/µl, injekce 2 µl
• Subjednotkový standard: koncentrace 0,1 µg/µl, injekce 2 µl

Instrumentace:

• LC systém: ACQUITY UPLC I-Class PLUS
• Detektor: ACQUITY RDa Mass Detector, TUV optický detektor
• Informatika: UNIFI Scientific Information System v1.9.4
• Kolony: BEH300 C4 a BioResolve RP mAb Polyphenyl

Podmínky:

• Intact Mass: gradient 7 min, teplota kolony 80 °C, mobilní fáze s 0,1 % FA nebo TFA
• MS: plný scan 400–7000 m/z, pozitivní ionizace, scan rate 2 Hz, custom napětí a teploty
• Subjednotky: gradient 15 min, podobné MS podmínky s mírně odlišným kuželovým napětím

Hlavní výsledky a diskuse

Systém BioAccord poskytl vysoce kvalitní spectra intact mAb s jasně rozlišenými glykoformami. De-konvoluce vedla ke správnému přiřazení hlavních glykoform a dosažení % RSD relativních abundancí nižších než 2,5 % napříč 13 injekcemi. Porovnání mobilní fáze s FA a TFA ukázalo, že použití TFA vyžaduje vyšší dávky vzorku a kuželové napětí pro potlačení aduktů, avšak výsledky byly srovnatelné s FA. Subjednotková analýza po IdeS štěpení odhalila dobře separované chromatografické píky pro scFc, LC a Fd s vysokým poměrem signál/šum a automatickým zpracováním dat.

Přínosy a praktické využití metody

Automatizované workflow snižuje závislost na expertech MS, zkracuje dobu zpracování dat a minimalizuje chyby. Systém je připraven pro regulovaná prostředí a umožňuje standardizaci metod mezi laboratořemi. Metoda podporuje efektivní rozhodování v rámci QC a pozdního vývoje bioterapeutik.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další rozšíření MS metodiky v rutině zabezpečení kvality díky pokračující automatizaci, podpoře cloudových platforem pro data management a integraci s dalšími bioanalytickými nástroji. Trendem je rozvoj vysokopropustných aplikací, detailní charakterizace glykosylací a modulární rozšíření workflow na nové biologické formy.

Závěr

Systém BioAccord v kombinaci s UNIFI platformou prokázal vynikající reprodukovatelnost, jednoduché ovládání a schopnost generovat informačně bohatá data vhodná pro regulovaná i neregulovaná prostředí. Díky tomu lze výrazně urychlit metodický vývoj a implementaci rutinních kontrolních analýz.

Reference

• Rogstad S. et al. J Am Soc Mass Spectrom. 2017, 28(5):786–794.
• Sokolowska I. et al. MAbs. 2017, 9:498–505.
• Xu W. et al. MAbs. 2017, 9:1186–1196.