A WORKFLOW DRIVEN PLATFORM SOLUTION FOR MAM-BASED CRTICAL QUALITY ATTRIBUTE MONITORING OF BIOTHERAPEUTICS IN PROCESS DEVELOPMENT AND QC

Význam tématu

Peptidově založené monitorování kritických kvalitativních atributů (CQAs) bioterapeutik je klíčové pro zajištění bezpečnosti a účinnosti léčiv během vývoje i výroby. Umožňuje včasnou detekci degradace a modifikací proteinu, čímž podporuje konzistentní kvalitu produktu.

Cíle a přehled studie

Cílem této studie je představit komplexní workflow pro Multiple Attribute Monitoring (MAM) založené na platformě BioAccord SmartMS s integrovaným softwarem UNIFI. Metoda kombinuje peptide mapping a accurate mass screening pro automatizované profilování a kvantifikaci modifikací terapeutických proteinů.

Použitá metodika a instrumentace

• Štěpení vzorku: Trastuzumab podrobený pH, teplotnímu a oxidačnímu stresu; redukce, alkylace, výměna pufru, trypsinová digest (20:1, 4 h, 37 °C).
• LC-MS systém BioAccord SmartMS
  • Kolona ACQUITY UPLC CSH C18 (1.7 µm, 2.1×100 mm), teplota 60 °C
  • Mobilní fáze A: 0.1 % FA ve vodě, B: 0.1 % FA v acetonitrilu
  • Gradient 1–35 % B za 52 min, průtok 0.2 mL/min, teplota vzorku 6 °C, injekce 5 µL
  • ESI+ režim, m/z 50–2000, capilární napětí 1.2 kV
• Software: UNIFI Scientific Information v1.9.4 s custom knihovnou peptidových atributů, inteligentní akvizice, zpracování i reporting dat.

Hlavní výsledky a diskuse

• Peptide mapping zajistil chromatografickou separaci peptidů a identifikaci modifikací (deamidace, oxidace) na základě fragmentačních spekter.
• Accurate mass screening poskytl relativní kvantifikaci modifikací extrakcí iontových chromatogramů (XIC) pro nativní i modifikované formy peptidů.
• Funkce limit checku vizualizuje atributy s překročením varovných a chybových limitů, což usnadňuje kontrolu kvality.
• Režim MS-only nabídnul srovnatelné výsledky s MS/MS, čímž zvýšil průchodnost analýz.
• Porovnávací režim umožnil rychlou identifikaci rozdílů mezi kontrolním a stresovaným vzorkem.

Přínosy a praktické využití metody

• End-to-end workflow od přípravy přes akvizici až po automatizovaný report splňuje požadavky cGMP.
• Jedno-tlačítkové spuštění, inteligentní diagnostika a automatické ladění usnadňují práci nekon MS odborníkům.
• Integrovaná knihovna peptidových atributů umožňuje přenos charakterizačních dat do rutinního monitoringu.
• Automatizace procesů zvyšuje efektivitu, zaručuje datovou integritu a zrychluje rozhodování v QC laboratořích.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšiřování a dynamická údržba knihoven atributů v reálném čase.
• Využití strojového učení a AI pro pokročilou analýzu vzorců modifikací.
• Integrace s online monitorovacími systémy pro kontinuální kontrolu výrobních procesů.
• Aplikace MAM přístupu na další analytické platformy, jako je glykanová analýza či intact protein screening.

Závěr

Platforma BioAccord s UNIFI nabízí robustní a uživatelsky přívětivé řešení pro monitorování kritických kvalitativních atributů bioterapeutik. Spojení peptide mappingu, accurate mass screeningu a inteligentních nástrojů zjednodušuje MAM studie a zvyšuje důvěryhodnost výsledků v rutinní i výzkumné praxi.