Verification of Quantitativity and Confirmation of Molecular Weight of Oligonucleotide therapeutics Using LCMS™-8060

Význam tématu

Analýza oligonukleotidových terapeutik pomocí LC–MS je klíčová pro kontrolu kvality a potvrzení molekulové hmotnosti těchto syntetických léčiv. Přesná kvantifikace a ověření integrity sekvence napomáhá zajištění bezpečnosti a účinnosti terapie.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem studie bylo demonstrovat metodiku stanovení 20 nukleotidů dlouhého 2'-MOE modifikovaného oligonukleotidu v rozsahu 1–300 ng/mL za použití LCMS-8060 a současně potvrdit jeho molekulovou hmotnost dekonvolucí multivalentních iontů.

Použitá metodika a instrumentace

Pro separaci byla využita vysokotlaká kapalinová chromatografie Nexera s C18 kolonou (50×2,1 mm, 2,5 μm). Mobilní fáze A obsahovala 50 mmol/L HFIP a 10 mmol/L DIPEA, fáze B acetonitril, gradient 5–15 % B v čase 0–3 min, tok 0,2 mL/min při 60 °C. Injekční objem činil 2 μL.
Detektor LCMS-8060 pracoval v negativním ESI režimu: full scan m/z 500–2000 a MRM přenos m/z 803,5 > 95,0. Parametry ionizačního zdroje: napětí –4 kV, teploty DL 300 °C, heat block 450 °C, interface 250 °C; plynné toky: nebulizace 3 L/min, sušení 8 L/min, ohřev 12 L/min. Software LabSolutions LCMS zajišťoval dekonvoluci multivalentních iontů.

Hlavní výsledky a diskuse

V MRM režimu byla potvrzena lineární kalibrační křivka v rozsahu 1–300 ng/mL s koeficientem determinace R2 = 0,998. Scan režim odhalil šestinásobné až osmínásobné nabití molekuly. Dekonvoluční analýza vyústila v experimentální molekulovou hmotnost 6436,37, což je v souladu s teoretickou hodnotou 6436,39.

Přínosy a praktické využití metody

• Přesná kvantifikace oligonukleotidů v nízkých koncentracích.
• Rychlé potvrzení molekulové hmotnosti s minimální chybou.
• Využití v preklinických studiích a kvalitativní kontrole výroby terapeutik.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření MRM metodiky na multiplexní stanovení různých modifikovaných oligonukleotidů a integrace s automatizovanou datovou analýzou. Další rozvoj softwarových dekonvolučních nástrojů umožní rychlejší a přesnější validaci komplexních biologických léků.

Závěr

Metoda LC–MS s využitím LCMS-8060 a dekonvoluce multivalentních iontů poskytuje spolehlivou kvantifikaci a potvrzení molekulové hmotnosti 2'-MOE modifikovaných oligonukleotidů v širokém dynamickém rozsahu.

Reference

1. Shimadzu Corporation: Application Note C231, First Edition Oct. 2020.