LC-MS/MS Analysis Using Coinjection Method with the SIL-30AC

Význam tématu

Automatizace přípravy vzorků hraje klíčovou roli v moderní laboratorní praxi, zejména při hromadném skrínování biologických materiálů, jako jsou sušené kapky krve (DBS). Eliminace manuálních kroků snižuje riziko lidské chyby, zkracuje dobu analýzy a umožňuje nepřetržitý provoz, což je zásadní pro vysokopropustné analytické úlohy.

Cíle a přehled studie

Studie se zaměřila na optimalizaci metody stanovení aminokyselin a acylkarnitinů z DBS pomocí LC-MS/MS. Klíčovým cílem bylo implementovat metodu coinjekce interního standardu přímo v autosampleru SIL-30AC, čímž se zjednoduší příprava vzorků, sníží spotřeba reagencií a zachová vysoká přesnost a opakovatelnost výsledků.

Použitá metodika a instrumentace

Pro analýzu byl využit autosampler Nexera Series SIL-30AC s vestavěnou funkcí předúpravy, systém LCMS-8040 (triple quadrupole) a software LabSolutions. Jako testovací sada posloužil komerční kit od ChromSystems. Hlavní kroky:

• Příprava DBS: vyřezání 3 mm disků z filtračního papíru.
• Extrahování aminokyselin a acylkarnitinů 100 µl extrakčního pufru za míchání 20 min při pokojové teplotě.
• Přenos extraktu do 96-well destičky.
• Coinjekce: automatické nasátí 1 µl interního standardu a 1 µl vzorku bez předchozí manuální přípravy.
• Analýza metodou flow injection (FIA) a MRM režimem na LC-MS/MS.

Hlavní výsledky a diskuse

Porovnání coinjekční metody s konvenční přípravou podle protokolu kitu prokázalo:

• Shodnost naměřených koncentrací vs. cílové hodnoty v rozsahu 0,89–1,06.
• Podobné výsledky i při opakovaných analyzách přes tři dny (n=10), což potvrdilo dobrou opakovatelnost.
• Redukci objemu interního standardu z 100 µl na 1 µl na jediné měření (spotřeba reagencií se snížila 20×).
• Zachování nízkého carryover díky silnému plášťovému oplachu autosampleru.

Přínosy a praktické využití metody

Výhody implementace coinjekčního protokolu:

• Výrazné zvýšení průchodnosti laboratoře (noční běh, nepřetržitý provoz).
• Snížení provozních nákladů na reagencie.
• Minimalizace variability spojené s manuálním přidáváním interního standardu.
• Jednodušší validace a standardizace metody v QA/QC prostředí.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další rozšiřování coinjekčních protokolů na širší spektrum analytů (metabolity, léky), integrace s laboratorními informačními systémy (LIMS) a vývoj inteligentních řídicích algoritmů pro adaptivní přípravu vzorků. Dále je perspektivní kombinace s vysokokapacitními platformami a nasazení v personalizované medicíně.

Závěr

Implementace coinjekční metody na autosampleru SIL-30AC s wykorzystáním LCMS-8040 umožnila zjednodušit přípravu vzorků, zachovat analytickou kvalitu a výrazně snížit spotřebu interního standardu. Metoda nabízí vysokou efektivitu a je vhodná pro rozsáhlé screeningové aplikace v klinických a průmyslových laboratořích.

Reference

Údaje byly převzaty z aplikačního článku Shimadzu Corporation, Application News No. C122 (2016).