LC/MS, LC/MS/MS, LC/QQQ
ZaměřeníKlinická analýza
VýrobceThermo Fisher Scientific, RECIPE
Význam tématu
Homocystein je klíčový biomarker v klinickém výzkumu zaměřeném na kardiovaskulární onemocnění a neurologické poruchy. Jeho správné stanovení v lidské plazmě či séru umožňuje vyhodnocení rizika a sledování účinnosti terapeutických intervencí.
Cíle a přehled studie / článku
Cílem bylo implementovat a validovat rychlou a citlivou LC-MS/MS metodu pro kvantifikaci celkové homocysteinu na instrumentaci Thermo Scientific Transcend II TLX-1 ve spojení s TSQ Endura triple kvadrupolem. Využita byla redukce všech forem homocysteinu do volné formy během přípravy vzorku.
Použitá metodika a instrumentace
Vzorek 50 µL plazmy nebo séra byl smíchán s redukčním roztokem a interním standardem (d8-homocystin), inkubován 5 minut, následně vyčistěn precipitací proteinů a po odstředění injikován. Chromatografie probíhala izokraticky, doba stanovení 70 sekund. Detekce byla provedena v pozitivním módu HESI SRM metodou na TSQ Endura. Data zpracováno pomocí TraceFinder 3.3.
Hlavní výsledky a diskuse
Metoda prokázala lineární rozsah 0,117 až 50,7 µmol/L s korelačním koeficientem R2 0,991. Limit kvantifikace byl stanoven na 0,117 µmol/L. Analytická přesnost se pohybovala v rozmezí bias 3,7–5,2 % pro tři úrovně kontrol. Intra-asay precize dosáhla maximálně 2,0 % CV a inter-asay precize maximálně 3,3 % CV.
Přínosy a praktické využití metody
- Rychlá příprava vzorku s jednoduchou redukcí a precipitací proteinů.
- Kratší doba analýzy ve srovnání s tradičními metodami (70 s na vzorek).
- Vysoká citlivost a spolehlivost vhodná pro klinický výzkum.
Budoucí trendy a možnosti využití
Možné rozšíření metody o multiplexní kvantifikaci dalších thiolů v plazmě či séru. Integrace s vysoce výkonnými hyphenovanými systémy pro zvýšení throughput a potenciální automatizace celé přípravy vzorků.
Závěr
Validovaná LC-MS/MS metoda na platformě Transcend II TLX-1/TSQ Endura splňuje požadavky klinického výzkumu na měření celkového homocysteinu v lidské plazmě či séru. Metoda se vyznačuje vysokou přesností, precizností a krátkým časem analýzy.
Použitá instrumentace
- LC systém Thermo Scientific Transcend II TLX-1
- Mass spektrometr Thermo Scientific TSQ Endura triple kvadrupol
- Heated electrospray ionizace v pozitivním módu
- Software Thermo Scientific TraceFinder 3.3
- Analytická kolona a mobilní fáze od RECIPE Chemicals + Instruments
Obsah byl automaticky vytvořen z originálního PDF dokumentu pomocí AI a může obsahovat nepřesnosti.
