OptiFlow™ Interface for TripleTOF® 6600 System

Význam tématu

V proteomických a metabolomických laboratořích se často paralelně řeší projekty vyžadující různé chromatografické režimy. Rychlá změna z nanoflow LC na microflow LC zvyšuje kapacitu stanovení rutinních vzorků s bohatým materiálem a uvolňuje čas pro citlivé analýzy.

Cíle a přehled studie

Studie představuje OptiFlow™ Interface v kombinaci s nanoLC™ 425 a TripleTOF® 6600, která umožňuje přechod mezi LC režimy během několika minut bez otevírání vakuové komory. Cílem bylo ověřit, zda výkon nového rozhraní je ekvivalentní nebo lepší než dřívější nanoDCI interface.

Použitá metodika a instrumentace

Pro porovnání byly instalovány více OptiFlow™ rozhraní a klasické nanoDCI na jeden systém TripleTOF 6600. Testovalo se:

• PepCalMix při naložení 20 fmol a 20 amol pro porovnání plošných signálů.
• SWATH® akvizice na komplexním buněčném lyzátu s detekcí více než 10000 peptidů.

Hlavní komponenty:

• nanoLC™ 425 System s dvěma gradientními kanály
• OptiFlow™ Source v micro a nano módu
• Turbo V™ Source pro vysoké průtoky
• SelexION® Technology pro diferenční mobilitní separaci
• TripleTOF® 6600 pro globální i cílené kvantitativní aplikace

Hlavní výsledky a diskuse

Výsledky ukázaly:

• Pro PepCalMix průměrný poměr signálů OptiFlow vs nanoDCI činil 1,6 při obou koncentracích, srovnatelnou nebo lepší citlivost.
• Replikabilita signálů (CV) byla obdobná u obou rozhraní.
• SWATH akvizice detekovala přes 10000 peptidů s <1 % FDR a ~90 % peptidů/proteinů mělo CV lepší než 20 %.

Přínosy a praktické využití metody

OptiFlow™ Interface zkracuje čas přepnutí chromatografického režimu na minuty bez vakuových zásahů, eliminuje potřebu nástrojů a umožňuje kombinovat high-throughput microflow s citlivým nanoflow v jednom přístroji.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření kompatibility s dalšími hmotnostními spektrometry a automatizace přepínacího procesu. Integrace pokročilých mobilitních separací a AI-řízená optimalizace metod by mohla dále zlepšit efektivitu a reproducibilitu analýz.

Závěr

OptiFlow™ Interface spolu s nanoLC™ 425 a TripleTOF® 6600 nabízí flexibilní, rychlé a vysoce výkonné řešení pro střídání mikro- a nanoflow LC-MS režimů. Validace prokázala ekvivalentní nebo lepší vlastnosti oproti předchozí nanoDCI konfiguraci, což zvyšuje robustnost a produktivitu laboratoří.

Reference

• Achieving Very High Reproducibility for Quantitative Proteomics with Nanoflow LC-MS - NanoLC 400 Series System. SCIEX Technical Note RUO-MKT-02-5755-A.
• Configuring the nanoLC 425 System for Both Nanoflow and Microflow LC-MS Workflows - Brief Instructions and Consumables List. SCIEX Technical Note RUO-MKT-02-7254-A.
• Easily Switch from Nanoflow to Microflow with OptiFlow Interface and nanoLC 425 System. SCIEX Application Note.
• SWATH Acquisition Performance Kit. SCIEX Reagent and Standard.
• Single Source Solution for Low Flow Chromatography - OptiFlow Turbo V Source. SCIEX Technical Note RUO-MKT-02-9701-A.