Simultaneous Analysis of Remdesivir and Metabolites in Human Plasma

Význam tématu

Remdesivir je antivirový prodrug schválený k léčbě závažných infekcí RNA viry, včetně COVID-19. Sledování jeho hladin a hladin aktivního metabolitu GS-441524 v lidské plazmě je klíčové pro farmakokinetická vyšetření, optimalizaci dávek a hodnocení účinnosti terapie.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout citlivou a robustní LC-MS/MS metodu pro simultánní kvantifikaci remdesiviru a jeho hlavního metabolitu GS-441524 v lidské plazmě. Metoda využívá UHPLC separaci spojenou s MRM detekcí na triple-quadrupolovém hmotnostním spektrometru.

Použitá metodika

Vzorky lidské plazmy ošetřené EDTA byly obohaceny o analyty remdesivir a GS-441524 plus stabilní izotopní vnitřní standardy ([U-Ring-13C6]-remdesivir, [13C5]-GS-441524). Příprava vzorku probíhala extrakcí přímým srážením bílkovin acetonitrilem za přítomnosti isopropanolu a vnitřního standardu, poté centrifugací a přímou injekcí supernatantu.

Použitá instrumentace

• UHPLC systém Nexera X2 (Shimadzu)
• Analytický sloupec Shim-pack Scepter C18-120, 50×2,1 mm, 1,9 µm
• Mobilní fáze A: 0,05 % kyselina mravenčí ve vodě; B: 0,05 % kyselina mravenčí v acetonitrilu; gradient 5 %→90 % B
• Hmotnostní spektrometr LCMS-8060 (Shimadzu) s Heated ESI
• MRM přechody: remdesivir m/z 603,05→272,10 (kvant.), 603,05→229,00 (kval.); GS-441524 m/z 291,90→163,05 (kvant.), 291,90→173,05 (kval.)
• Parametry plynu: Nebulizační plyn 3 L/min, sušící plyn 10 L/min, ohřívací plyn 10 L/min

Hlavní výsledky a diskuse

Kalibrační křivky pro remdesivir (100–5000 ng/mL) a GS-441524 (5–500 ng/mL) prokázaly vynikající linearitu (R2 > 0,999). Precision (%RSD) se pohybovala u remdesiviru v rozmezí 0,8–1,8 % a u GS-441524 2,2–5,0 %, přesnost byla v rozmezí 92–107 % resp. 94,8–106 %. Stabilita metody byla ověřena 100násobnou injekcí vzorku (1000 ng/mL remdesiviru, 50 ng/mL GS-441524) během dvou dnů, %RSD ploch zůstalo mezi 2,2–3,9 %, což poukazuje na dlouhodobou robustnost a reprodukovatelnost.

Přínosy a praktické využití metody

Vyvinutá metoda poskytuje vysokou citlivost, selektivitu a rychlost analýzy (<5 min běh). Umožňuje spolehlivé farmakokinetické studie a monitorování hladin léčiva v klinických i preklinických laboratořích.

Budoucí trendy a možnosti využití

Metoda může být rozšířena na další nukleosidové analogy a metabolity. Další automatizace přípravy vzorků, integrace s vyhodnocovacími softwarovými platformami a využití vysoce rozlišovací hmotnostní spektrometrie (HRMS) podpoří širší implementaci v personalizovaném lékařství a výzkumu antivirových terapií.

Závěr

Vyvinutá UHPLC-MS/MS metoda pro simultánní kvantifikaci remdesiviru a metabolitu GS-441524 v lidské plazmě prokázala vynikající linearitu, přesnost, preciznost a dlouhodobou stabilitu. Metoda je vhodná pro farmakokinetické studie a rutinní monitorování v biomedicínských laboratořích.

Reference

• Richard T et al. Remdesivir: A Review of Its Discovery and Development Leading to Emergency Use Authorization for Treatment of COVID-19. ACS Central Science.