Simultaneous Analysis of Remdesivir and Metabolites in Human plasma Using Fully Automated Sample Preparation LC/MS/MS System

Význam tématu

Remdesivir je antivirotické činidlo používané pro léčbu infekcí způsobených RNA viry, včetně onemocnění COVID-19. Jeho monitorování v plazmě pacientů je klíčové pro pochopení farmakokinetiky, optimalizaci dávkování a zajištění bezpečného a efektivního podávání léku.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout plně automatizovaný LC/MS/MS postup pro simultánní stanovení remdesiviru a jeho hlavního metabolitu GS-441524 v lidské plazmě s minimální pracovní náročností a vysokou reprodukovatelností. Studie představuje řešení s použitím systému CLAM+LC/MS/MS od Shimadzu, které integruje automatickou přípravu vzorků a analýzu.

Použitá metodika a instrumentace

Metoda kombinuje automatizované kroky deproteinace a filtrace vzorku s následující analýzou:

• Příprava vzorku: smíchání 20 μL 75% IPA, 50 μL plazmy, 10 μL interního standardu (U-Ring-13C6-remdesivir a 13C5-GS-441524) a 100 μL acetonitrilu, protřesení a filtrace PTFE membránou.
• Systém: CLAMTM+LC/MS/MS (Shimadzu).
• LC podmínky: UHPLC Nexera™ X2, Shim-pack Scepter C18-120 (50×2,1 mm, 1,9 μm), gradientní eluce s fázemi A (0,05% kyselina mravenčí–voda) a B (0,05% kyselina mravenčí–acetonitril).
• MS podmínky: LCMS-8060, režim MRM (+), rozhraní Heated ESI, teplota ionizačního článku 400 °C, objem injekce 2 μL ko-injektováno se 20 μL vody.

Hlavní výsledky a diskuse

Kalibrační křivky pro remdesivir (100–5000 ng/mL) a GS-441524 (5–500 ng/mL) vykázaly lineární závislosti s R2 > 0,9985. Přesnost (accuracy) při všech bodech byla v rozmezí 87,8–108 % (remdesivir) a 94,5–105 % (GS-441524). Intradenní opakovatelnost CV %RSD dosahovala 0,5–2,9 % pro remdesivir a 2,4–4,9 % pro metabolit. Mezi-denní reprodukovatelnost vykázala CV <7,8 % a přesnost v mezích 82–107 % (LLOQ do vysokých koncentrací).

Přínosy a praktické využití metody

Automatizovaná příprava snižuje variabilitu, riziko kontaminace a expozici obsluhy. Zkracuje dobu analýzy na 7 minut na vzorek včetně přípravy. Metoda je vhodná pro farmakokinetická studia, klinické a preklinické hodnocení, QA/QC v biopharmaceutickém průmyslu.

Budoucí trendy a možnosti využití

Automatizované LC/MS/MS platformy budou dále rozšiřovány o multiplexní analýzy analogických antivirotik, miniaturizaci přípravy vzorků, integraci on-line monitoringu a pokročilé datové zpracování pomocí umělé inteligence.

Závěr

Vyvinutá plně automatizovaná metoda pro stanovení remdesiviru a GS-441524 v lidské plazmě prokázala vysokou přesnost, opakovatelnost a robustnost. Umožňuje rychlé a spolehlivé měření, což podporuje její využití v klinických studiích a rutinním provozu laboratorních pracovišť.

Reference

• 1) Richard T et al., Remdesivir: A Review of Its Discovery and Development Leading to Emergency Use Authorization for Treatment of COVID-19. ACS Cent. Sci.