Highly Sensitive and Robust UPLC-MS/MS Quantification of Nitrosamine Impurities in Sartan and Ranitidine Drug Substances

Význam tématu

Genotoxické nitrosaminy představují závažnou kontaminaci léčiv s prokázaným karcinogenním potenciálem. Nedávné nálezy nitrosaminů v ranitidinu a sartanových API vyvolaly řadu stažení produktů z trhu a zpřísnění regulačních limitů (0,3 a 0,03 ppm). Pro zajištění bezpečnosti léčiv je klíčové vyvíjet citlivé, robustní a rychlé analytické metody, které dokáží spolehlivě stanovovat tyto nepřípustné nečistoty na úrovni desítek pikogramů na mililitr.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem studie je představit optimalizovaný UPLC-MS/MS protokol pro souběžné stanovení nejčastějších nitrosaminů (NDMA, NDEA, NDIPA, NDBA apod.) v sartanových API a ranitidinu. Práce zahrnuje porovnání výkonu IonSABRE APCI a ESI zdrojů, chromatografickou separaci, MRM detekci a validaci citlivosti metody v rozsahu 0,025–0,1 ng/mL.

Použitá metodika a instrumentace

Metoda využívá reverzní UPLC kolonu ACQUITY UPLC HSS T3 (2,1×100 mm, 1,6 µm) při 40 °C a 7min gradientu vody a methanolu s 0,1 % kyseliny mravenčí a 5 mM formiátu amonného. Detekce je prováděna na Xevo TQ-XS tandemovém hmotnostním spektrometru, kde IonSABRE APCI dosahuje až 10násobného nárůstu citlivosti oproti klasickému ESI. Vyhodnocení probíhá v režimu MRM s optimalizovanými přechody pro každý analyzát.

Použitá instrumentace

• LC: ACQUITY UPLC I-Class PLUS
• Kolona: ACQUITY UPLC HSS T3 2,1×100 mm, 1,6 µm
• MS: Xevo TQ-XS s IonSABRE APCI a ESI sondou
• Mobile fáze: voda/methanol + 0,1 % formová kyselina + 5 mM formiát amonný
• Detekce: MRM přechody pro NDMA, NDEA, NDIPA, NDBA aj.
• Gradient: 98 % A → 5 % A za 3,75 min, návrat na 98 % A do 0,41 min, celkový čas 7 min
• Divert ventil pro odplach API do odpadu během analýzy

Hlavní výsledky a diskuse

Porovnání IonSABRE APCI versus ESI ukázalo až 10× vyšší odezvu pro NDMA. Metoda dosáhla LLOQ 0,025–0,1 ng/mL při signál-šum poměru >10. Chromatografická separace zajistila spolehlivé oddělení všech analyzovaných nitrosaminů během 7 min. Aplikace na ranitidinový DP odhalila endogenní NDMA ca. 29 ng/mL. Opakovatelnost retence i kvantifikace byla v rámci RSD <10 %.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda nabízí vysokou citlivost a selektivitu, krátký čas analýzy a robustnost vhodnou pro rutinní kontrolu jak API, tak hotových léčivých přípravků. Lze ji integrovat do QA/QC laboratoří pro monitorování regulačních tarifů a rychlé vyšetření incidentů kontaminace.

Budoucí trendy a možnosti využití

Rozšíření panelu stanovovaných nitrosaminů, implementace vysokorozlišovací MS pro potvrzování struktur, automatizace přípravy vzorků a přechod na udržitelnější mobilní fáze představují klíčové směry dalšího vývoje. Dále se očekává adaptace metody na další třídy API a biotechnologické matrice.

Závěr

Popsaná UPLC-MS/MS metoda s IonSABRE APCI demonstrovala výjimečnou citlivost, rychlost a reprodukovatelnost pro stanovení nitrosaminů v sartanových API i ranitidinu. Splňuje přísné požadavky regulatorních orgánů na detekci genotoxických nečistot a představuje efektivní nástroj pro rutinní kontrolu bezpečnosti léčiv.