A Streamlined Workflow for Quantitative Bioanalysis using waters_connect for Quantitation Software: A Case Study Using Gefitinib

Význam tématu

Preklinické a rané farmakokinetické a toxikokinetické studie jsou klíčové pro hodnocení nových léčivých látek. Kvantitativní bioanalýza pomocí LC-MS/MS umožňuje přesné stanovení koncentrace léčiva a metabolitů v biologických matricích, což je nezbytné pro výpočet farmakokinetických parametrů a zajištění dodržení regulačních požadavků.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem aplikace waters_connect for Quantitation Software je zjednodušit vývoj a validaci LC-MS/MS metod, analýzu vzorků a generování reportů v souladu s regulačními standardy. Na konkrétním příkladu stanovení gefitinibu a jeho hlavních metabolitů v plazmě potkana ukazuje případová studie postup optimalizace, analýzy a vyhodnocení výsledků.

Použitá metodika

Vzorky plazmy od potkanů (10 mg/kg gefitinibu subkutánně) byly odebírány časově 0,1–24 h po dávce. Extrakce vzorků proběhla na 96-destičce Oasis HLB po přidání vnitřního standardu (gefitinib-d6). Po praní a elučním kroku byla část eluátu naředěna 50:50 methanol:voda a analyzována UHPLC-MS/MS. Chromatografie proběhla na BEH C18 kolóně (2,1×100 mm, 1,7 µm) s gradientem 5–50 % organické fáze za 2,9 min. Metoda MRM optimalizovaná pomocí nástroje waters_connect určovala přechody 447.18→128.1 pro gefitinib, 453.16→134.1 pro d6-IS a 433.05→128.1 pro O-desmethyl metabolit.

Použitá instrumentace

• ACQUITY Premier UPLC Chromatography System
• Xevo TQ Absolute XR Tandem Quadrupole Mass Spectrometer
• 96-well Oasis HLB SPE destička
• waters_connect for Quantitation Software (MS Quan 2.3)

Hlavní výsledky a diskuse

Křivky kalibrace pro gefitinib a O-desmethyl metabolit byly lineární v rozmezí 1–1000 ng/mL (R2 > 0,999). Přesnost a opakovatelnost QC vzorků byla v toleranci ±15 %. Po subkutánní aplikaci dosáhl gefitinib Cmax 58,9 ng/mL v čase 6 h, poločas 6,5 h a AUC0–t 670 ng·h/mL. O-desmethyl metabolit vykázal Cmax 1,72 ng/mL, T½ 8,1 h a AUC0–t 17,2 ng·h/mL, morfolino-karbonylový metabolit (M605211) měl Cmax 6,0 ng/mL, T½ 3,8 h a AUC0–t 88,2 ng·h/mL. Další dva metabolity byly pod LOQ.

Přínosy a praktické využití metody

• Automatizovaná optimalizace MRM přechodů bez nutnosti expertů
• Zrychlené vytváření a spuštění LC-MS metod s minimem přepisování dat
• Integrovaná data-driven kontrola kvality, review špiček a reportování

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekávají se další vylepšení v oblasti umělé inteligence pro automatickou integraci a hodnocení dat, rozšíření podpory širší škály chemických sloučenin a biologických matic, migrace do cloudových platforem pro centralizované řízení analýz a zvýšení throughput pro vysokoprodukční laboratoře.

Závěr

Waters_connect for Quantitation Software v kombinaci s ACQUITY Premier UPLC a Xevo TQ Absolute XR zefektivňuje celý proces vývoje a validace bioanalytických LC-MS/MS metod, analýzu vzorků a zpracování výsledků v souladu s regulačními standardy. Případová studie stanovení gefitinibu v plazmě potkana potvrzuje spolehlivost, přesnost a rychlost pracovního postupu.

Reference

1. Molloy BJ, King A, Gethings LA, Plumb RS, Mortishire-Smith RJ, Wilson ID. Xenobiotica. 2023;53(2):93–105.
2. Hu Y, Xue X, Han T et al. Commun Biol. 2025;8:1316.
3. Dhillon S. Target Oncol. 2015;10:153–170.
4. McKillop D et al. Xenobiotica. 2004;34(10):901–915.
5. McKillop D et al. Xenobiotica. 2004;34:917–934.
6. Molloy BJ et al. Xenobiotica. 2021;51:434–446.