Analysis of N-nitroso-nebivolol, Nitroso Drug Substance Related impurity in Nebivolol 20 mg tablet formulation using LC-MS/MS system

Význam tématu

Detekce a kvantifikace N-nitroso-nebivololu je klíčová vzhledem k jeho karcinogennímu potenciálu a přísným regulačním limitům (FDA třída 4, 1 500 ng/den). Metoda umožňuje ověřit, že obsah nežádoucího nitrosaminu v tabletách s nebivololem nepřekračuje povolené hodnoty, a zajišťuje bezpečnost pacientů.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo vyvinout vysoce specifickou, citlivou a reprodukovatelnou LC-MS/MS metodu pro stanovení N-nitroso-nebivololu v dávce 20 mg nebivololu. Studie zahrnuje optimalizaci chromatografie a MRM podmínek pro zajištění spolehlivé separace a kvantifikace při hladinách pod regulačním limitem.

Použitá metodika a instrumentace

Pro analýzu byl použit Agilent 1290 Infinity III UHPLC systém spojený s 6495D triple quadrupolem. Separace probíhala na kolonce Agilent Pursuit XRs 3 Diphenyl (150 × 3 mm) při průtoku 0,5 mL/min s mobilními fázemi: A – 1 mM ammonium trifluoroacetátu + 0,004 % kyseliny mravenčí ve vodě, B – methanol. Ionizace proběhla pomocí Agilent Jet Stream (AJS) v pozitivním módu. MRM přechody (m/z 435,2 → 254,0) byly automaticky optimalizovány v prostředí MassHunter Acquisition.

Hlavní výsledky a diskuse

Rozlišení mezi API a nitrosaminem dosahuje ~10 min, což umožňuje efektivní odvedení vysoce koncentrovaného API do odpadu a minimalizaci interferencí. LOD a LOQ byly zjištěny jako 2 pg/mL (S/N > 20:1) a 5 pg/mL (S/N > 50:1). Kalibrační rovnice v rozmezí 5 pg/mL až 50 ng/mL vykázala lineárnost R2 = 0,997 (1/x vážení). Reprodukční schopnost při LOQ (n = 6) ukázala RSD ~3,1 %. Spike recovery testy na API, placebu a tabletách přinesly 116,8 %, 108,3 % a 111,8 % při hladině 200 pg/mL.

Přínosy a praktické využití metody

• Vysoce citlivé stanovení umožňující detekovat nitrosamin pod regulačním limitem.
• Robustní a reprodukovatelná metoda vhodná pro rutinní QA/QC v potravinářském a farmaceutickém průmyslu.
• Integrované odstraňování API během analýzy minimalizuje rušení signálu impurity.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření metody na další potenciálně genotoxické nitrosaminy ve farmaceutických produktech.
• Integrace vysokého rozlišení (HR) MS pro ještě vyšší selektivitu.
• Automatizace přípravy vzorků a on-line čištění pro zvýšení průchodnosti laboratoře.

Závěr

Vyvinutá LC-MS/MS metoda pro stanovení N-nitroso-nebivololu prokázala vynikající citlivost, lineárnost a reprodukovatelnost a vyhovuje regulačním požadavkům na úrovních řádu pg/mL. Metoda je vhodná pro rutinní kontrolu kvality tablet nebivololu.

Reference

Prasanth J., Banerjee S., Vyas S. Determination of Genotoxic Nitrosamine Impurity in Bumetanide API and Tablets Using the Agilent 6470 Triple Quadrupole LC/MS. Agilent Technologies Application Note 5994-2967EN, 2020.