Quantitation of N-Nitroso Moxifloxacin in 400 mg Moxifloxacin Tablet Formulation

Význam tématu

Nežádoucí nitrosaminové impurity v lécích jsou vysoce karcinogenní, a kvantifikace N-nitroso moxifloxacinu je klíčová pro bezpečnost pacientů. FDA stanovila limit příjmu 1500 ng/den pro tyto impurity. Vysoce citlivé analytické metody zajišťují dodržení regulačních limitů a udržení kvality léčiv.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo vyvinout spolehlivou kvantitativní metodu pro stanovení N-nitroso moxifloxacinu v 400 mg tabletách moxifloxacinu. Studie využívá LC/MS/MS systém Agilent 1290 Infinity II a 6495D QqQ a klade důraz na nízké limity detekce a kvantifikace a robustní separaci analytu od API.

Použitá instrumentace

• Agilent 1290 Infinity II LC: vysokorychlostní pumpa, multisampler, multicolumn termostat, DAD detektor
• Agilent 6495D triple quadrupole LC/MS/MS se zdrojem Jet Stream Technology (AJS)

Použitá metodika

• Chromatografie: kolona Pursuit XRS3 Diphenyl (150×3 mm), mobilní fáze A: voda s 4,5 mM amonnou solí, 0,5 mM amonným fluoridem a 0,1 % kyselinou mravenčí; fáze B: methanol; gradient, tok 0,4 mL/min, teplota kolony 40 °C
• MS/MS v režimu MRM: prekurzor m/z 431,2 → produkt m/z 232,0, fragmentace 166 V, CE 50 V, pozitivní polarita
• Příprava standardů: 100 µg/mL stock, 12bodová kalibrace 2,5 pg/mL–10 ng/mL; příprava vzorků z tablet extrakcí v acetonitril:voda (1:1)
• Diverze API mimo MS během analýzy pomocí programovatelného ventilu

Hlavní výsledky a diskuse

• LOD 1 pg/mL, LOQ 2,5 pg/mL s S/N při LOQ 232:1
• Lineární rozsah 2,5 pg/mL až 10 ng/mL, R2 > 0,991 (1/x2 vážení)
• Průměrná návratnost v placebu 86,3 % při LOQ, reprodukovatelnost %RSD ≈ 4,7 při sedmi opakovaných injekcích
• Separace analytu od API > 1,5 min; diverter zajišťuje řízené směrování eluátu mimo MS během vysoké koncentrace API

Přínosy a praktické využití metody

Metoda poskytuje vysokou citlivost, specifickost a robustnost, vhodná pro QA/QC oddělení a validaci kvality výrobních šarží tablet s moxifloxacinem. Umožňuje rychlou a spolehlivou kontrolu nitrosaminových impurit pod regulačními limity.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření metody na další nitrosaminové impurity a různé lékové formy
• Automatizace přípravy vzorků a zpracování dat pro vyšší propustnost laboratorních analýz
• Integrace s online monitoringem pro kontinuální kontrolu kvality v procesu výroby
• Vývoj pokročilých workflow pro screening metabolit a degradací nitrosaminů in vivo

Závěr

Vyvinutá LC/MS/MS MRM metoda splňuje přísné požadavky na detekci a kvantifikaci N-nitroso moxifloxacinu v tabletách. Nabízí vynikající citlivost, přesnost a odolnost vůči interferencím API, což zaručuje bezpečnost pacienta i regulační shodu.

Reference

1. Joseph P., Banerjee S., Vyas S. Determination of Genotoxic Nitrosamine Impurity in Bumetanide API and Tablets Using the Agilent 6470 Triple Quadrupole LC/MS. Agilent Technologies Application Note, 5994-2967EN, 2020.
2. Wu L. et al. Determination of Nitrosamine Impurities Using the Agilent 6475 Triple Quadrupole LC/MS System. Agilent Technologies Application Note, 5994-5919EN, 2023.