Determination of Genotoxic Nitrosamine Impurity in Bumetanide API and Tablets Using the Agilent 6470 Triple Quadrupole LC/MS

Význam tématu

Genotoxické nitrosaminy patří mezi vysoce rizikové nečistoty v léčivých přípravcích, které mohou dlouhodobě ohrozit zdraví pacienta. Regulátoři stanovují přísné limity pro jejich koncentraci, a proto je vyžadována citlivá, spolehlivá a rychlá analytická metoda pro jejich detekci a kvantifikaci.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem studie bylo vyvinout a validovat LC–MS/MS metodu založenou na Multiple Reaction Monitoring (MRM) pro stanovení N-nitroso Bumetanidu v API a tabletách. Důraz byl kladen na překonání matričních efektů způsobených vysokým obsahem excipientů a na potvrzovací analýzu pomocí tMRM, aby se minimalizovalo riziko falešně pozitivních výsledků.

Použitá metodika

Vzorky API, placeba a tablet byly extrahovány methanolem a vodou, poté centrifugovány a filtrovány přes PVDF filtre. Chromatografické rozdělení probíhalo na koloně Poroshell HPH-C18 3×150 mm při gradientním eluci s 0,5 % kyselinou mravenčí ve vodě a metanolem. Detekce byla provedena v pozitivním ESI režimu na triple kvadrupolu s optimalizovanými přechody MRM a použitím integrovaného diverteru pro zamezení kontaminace MS vysokou koncentrací API. Kvantifikace zahrnovala kalibrační křivku od 0,1 do 100 ng/mL s vážením 1/X2.

Použitá instrumentace

• Agilent 1290 Infinity II LC (pumpa, multisampler, multikolona, DAD detektor)
• Agilent 6470 Triple Quadrupole LC/MS
• MassHunter Data Acquisition a Qualitative/Quantitative Analysis software
• Integrovaný diverter ventil

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda dosáhla limitu kvantifikace 0,1 ng/mL (S/N >120), linearita měla R2=0,9957. Reprodukovatelnost pro osemnásobné injekce 1 ng/mL byla v rámci ±5 % RSD. Recoverie API a tablet se pohybovaly mezi 89 a 119 %. tMRM konfirmační technika potvrdila identitu nitrosaminy s library shodou 99,9 %. Integrovaný diverter významně omezil matriční rušení a ochránil hmotnostní spektrometr před vysokou zatěžovací dávkou API.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje spolehlivé sledování genotoxických nitrosaminů v surovině i hotových tabletách v souladu s regulačními požadavky. Díky vysoké citlivosti a robustnosti je vhodná pro rutinní QA/QC laboratoře ve farmaceutickém průmyslu.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření aplikace na sledování dalších nitrosaminových nečistot v různých farmaceutických matricích. Dalším směrem je integrace automatizovaných vzorkovacích systémů a využití HRMS pro nečekané nebo vzácné genotoxické látky.

Závěr

Popsaná MRM/tMRM LC–MS/MS metoda pro stanovení N-nitroso Bumetanidu nabízí vysokou citlivost, přesnost i konfirmační výkon. Splňuje regulační kritéria a poskytuje spolehlivý nástroj pro kontrolu genotoxických nečistot v API a tabletkách.

Reference

• Ward A., Heel R. C. Bumetanide: review of its pharmacodynamic and pharmacokinetic properties and therapeutic use. Drugs 1984;28(5):426–464.
• Prasad N. V. Tata et al. Analytical profiles of drug substances and excipients. 1993;22:107–144.
• Gupta et al. Genotoxic impurities: an important regulatory aspect. Asian J. Pharm. Clin. Res. 2020;13(6):10–25.
• FDA Guidance: Development and validation of a RapidFire-MS/MS method for nitrosamines screening.
• US FDA LC-HRMS method for NDMA in ranitidine. 2019.
• Mani C., Banerjee S. Determination of nitrosamine impurities using Ultivo Triple Quadrupole LC/MS. Agilent application note 2019.
• Covert K. How to catch a potential mutagenic impurity. Agilent application note 2019.