Impurity profiling of mycophenolate mofetil using an Orbitrap Exploris 120 mass spectrometer and Vanquish Horizon UHPLC combined with Compound Discoverer software

Význam tématu

Profil stopových nečistot v léčivých látkách je klíčový pro hodnocení bezpečnosti, toxicity a dodržování regulačních požadavků. Mykofenolát mofetilu (MMF) je prodrug imunosupresiva široce používaný v transplantologii. Detailní charakterizace jeho nečistot zajišťuje spolehlivost a účinnost finálního farmaceutického produktu.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo představit komplexní workflow pro rychlou a přesnou identifikaci a strukturální určení nečistot MMF. Workflow zahrnuje:

• UHPLC Vanquish Horizon
• HRAM-Orbitrap Exploris 120
• Software Compound Discoverer 3.2

Použitá metodika a instrumentace

• Příprava vzorku: zásobní roztok 1 mg/mL v acetonitrilu, pracovní roztok 0,25 mg/mL ve vodě s 25 % ACN.
• Chromatografie: Vanquish Horizon UHPLC, kolona Hypersil GOLD C18 (2,1×100 mm, 1,9 µm), 50 °C, 0,4 mL/min, gradient 10–95 % ACN ve 20 min.
• Detekce UV: Diodový array detektor při 254 nm.
• Hmotnostní spektrometrie: Orbitrap Exploris 120, OptaMax NG ESI, rozsah m/z 125–1500, plný scan R 60 000 a ddMS2 R 15 000, rychlé přepínání polarity, interní kalibrace EASY-IC.

Hlavní výsledky a diskuse

• Systém dosáhl vysoké dynamiky, citlivosti a přesnosti (duty cycle přibližně 1 s), umožňující získat full scan i MS2 v obou iontových polárních režimech v jedné analýze.
• Identifikováno bylo 28 nečistot: 16 generovaných běžnými reakcemi (dealkylace, oxidace, dehydratace aj.) a 12 detekovaných uživatelsky definovanými uzly (Compound Class, Pattern Scoring).
• Čtyři izomerické nečistoty s m/z 450,2121 byly odděleny a jejich struktury navrženy na základě HRAM MS2 fragmentace.
• De novo navržené struktury byly potvrzeny FISh skórováním ve Compound Discoverer 3.2.

Přínosy a praktické využití metody

• Vyšší efektivita díky jediné chromatografické injekci s polarity switchingem.
• Integrovaný software pro řízení měření i detailní zpracování dat.
• Možnost detekce jak očekávaných, tak neočekávaných nečistot.
• Platforma je aplikovatelná i na metabolity či E&L analýzy.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Automatizované reporty propojené s LIMS.
• Nasazení umělé inteligence pro strukturální návrhy neznámých nečistot.
• On-line monitorování kvality ve výrobě léčiv.
• Rozšíření na další třídy malých molekul a biomarkerů.

Závěr

Workflow spojující Vanquish Horizon UHPLC s Orbitrap Exploris 120 a pokročilým softwarem Compound Discoverer 3.2 poskytuje robustní nástroj pro kompletní profilování nečistot mykofenolátu mofetilu. Metoda zajistí vysokou citlivost, přesnost a zrychlené zpracování dat, což podporuje splnění regulačních požadavků a zvyšuje efektivitu farmaceutické analýzy.