Which UHPLC for LC-MS?

Význam tématu

Moderní farmaceutické, environmentální i potravinářské laboratoře vyžadují rychlé a spolehlivé LC-MS analýzy s vysokou propustností vzorků a špičkovým rozlišením. UHPLC systémy s tlakem nad 600 bar a sub-2 µm částicemi v kolonkách umožňují dosahovat kratších analytických běhů, vyšší selektivity a nižší spotřeby eluentu.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem prezentace bylo porovnat různé konfigurace UHPLC systémů Thermo Scientific Vanquish (Flex Quaternary, Flex Binary, Horizon) pro LC-MS aplikace a ukázat dopad gradient delay volume na celkový čas analýzy (TAT) a propustnost vzorků.

Použitá metodika a instrumentace

Pro vyhodnocení výkonu systémů byly použity:

• Vanquish Flex Quaternary pumpa (LPG, 1000 bar, 8 mL/min)
• Vanquish Flex Binary pumpa (HPG, 1000 bar, 8 mL/min)
• Vanquish Horizon pumpa (HPG, 1500 bar, 5 mL/min)
• Kolonky Thermo Scientific Hypersil GOLD 50 × 2,1 mm, 1,9 µm
• MS detektory Q Exactive Orbitrap a TSQ Quantiva

Hlavní výsledky a diskuse

Bylo prokázáno, že gradient delay volume (GDV) před sloupcem výrazně ovlivňuje dobu návratu k počáteční mobilní fázi a tím propustnost:

• LPG systémy vykazovaly GDV kolem 35 µL, vyšší TAT a posuny retenčních časů při krátkých bězích.
• HPG systémy (Flex Binary, Horizon) měly GDV výrazně nižší, což vedlo k úspoře času na ekvilibraci a lepší reprodukovatelnosti RT.
• Vanquish Horizon dosáhla TAT pro 2min gradient již ≈1,85 min a propustnosti až 567 vzorků/den.

Přínosy a praktické využití metody

Optimalizace GDV a volba pumpové technologie výrazně zkracuje celkový čas analýzy, snižuje spotřebu eluentu a zvyšuje denní počet vyhodnocených vzorků. Pro krátké běhy (<10 min) se doporučují HPG systémy, zatímco pro složitější gradienty s více komponentami LPG systémy s vícekanálovým mícháním.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další zlepšení mechanické stability pump a nízkodisperzních obvodů pro ještě nižší GDV. Kombinace tandemových UHPLC konfigurací a faster-scanning MS detektory umožní paralelní přípravu kolonek a ještě vyšší propustnost, zejména v oblasti proteomiky a biofarmacie.

Závěr

Výběr správného UHPLC systému zásadně ovlivňuje produktivitu LC-MS laboratoře. Pro maximální throughput jsou nejvhodnější HPG pumpy jako Vanquish Horizon, zatímco pro metodický vývoj a vícekanálové gradienty lze využít Flex Quaternary.

Reference

V prezentovaném materiálu nejsou uvedeny samostatné literární odkazy.