HPLC Analysis with Fluorescence Detection of Chlorophyll Degradation Products Pheophytins and Pyropheophytin in Virgin Olive Oil

Význam tématu

Monitoring termální degradace chlorofylu v extra panenském olivovém oleji je klíčový pro posuzování jeho kvality, správných skladovacích podmínek a detekci možných adulterací. Feofytiny a pirofeofytin a slouží jako spolehlivé markery těchto změn.

Cíle a přehled studie

Cílem studie je vyvinout rychlou a přímou HPLC metodu s fluorescenční detekcí (FLD) pro stanovení feofytinů a pirofeofytinu a v extra panenském olivovém oleji bez náročné předúpravy. Metoda byla porovnána se standardní mezinárodní normou ISO 29841 využívající SPE a UV detektor.

Použitá metodika

Odstupnění vzorků spočívá v jednoduchém naředění olivového oleje isopropanolem bez dalšího zpracování. Chromatografie probíhá na C18 kolonu (3,0×100 mm, 1,8 µm) za použití čtyřnásobné gradientní eluce zahrnující tetrahydrofuran jako silný proplach. Detekce probíhá excitací při 430 nm a emisí při 670 nm.

Použitá instrumentace

• Agilent 1260 Infinity Quaternary Pump
• Agilent 1290 Infinity Autosampler
• Agilent 1290 Infinity Thermostatted Column Compartment
• Agilent 1260 Infinity Fluorescence Detector s Hamamatsu R928HA PMT
• Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18 kolona (3,0×100 mm, 1,8 µm)

Hlavní výsledky a diskuse

Výměna standardního fotonásobiče za model R928HA zvýšila hrubou citlivost přibližně 120× a po zohlednění snížení šumu dosáhla celkového zlepšení kolem 180×. Metoda umožnila kvalitní separaci feofytinu a, feofytinu a' i pirofeofytinu a. Doba analýzy se zkrátila z více než 40 minut na 25 minut a spotřeba rozpouštědel klesla o více než 60 %. Nízké koncentrace pirofeofytinu a (např. 6 %) nebyly u standardní SPE/UV metody detekovatelné, zatímco modifikované FLD umožnilo spolehlivou kvantifikaci i v extra světlých olejích.

Přínosy a praktické využití metody

Nová metoda přináší výrazné snížení času, nákladů na spotřební materiál i rozpouštědla. Umožňuje rychlou a citlivou kontrolu kvality velkého počtu vzorků, což ocení jak výrobci, tak kontrolní laboratoře.

Budoucí trendy a možnosti využití

Metodu lze dále automatizovat pro online monitoring výroby a skladování oleje. Potenciál spočívá rovněž v kombinaci s hmotnostní spektrometrií pro identifikaci dalších degradovaných sloučenin a v aplikaci chemometrických nástrojů pro komplexnější hodnocení kvality.

Závěr

Modifikace HPLC-FLD metody prostřednictvím výměny fotonásobiče na červeně citlivý model R928HA nabízí efektivní, rychlou a vysoce citlivou alternativu ke standardní ISO SPE/UV metodě pro stanovení degradace chlorofylů v extra panenském olivovém oleji.

Reference

• D. Hornero-Méndez, B. Gandul-Rojas a M.I. Mínguez-Mosquera Routine and sensitive SPE-HPLC method for quantitative determination of pheophytin a and pyropheophytin a in olive oils Food Research International 38, 1067–1072 (2005)
• ISO 29841:2009 Vegetable fats and oils – Determination of the degradation products of chlorophylls a and a’