Analysis of β-agonists Using a Core Enhanced Technology Accucore Phenyl-Hexyl HPLC Column

Význam tématu

β-agonisty představují skupinu syntetických látek používaných v lékařské praxi pro léčbu astmatu a akutních plicních onemocnění a v živočišné výrobě jako růstové promotory. Rezidua těchto sloučenin v potravinách mohou ohrozit spotřebitele, proto je nezbytné vyvinout rychlé, citlivé a spolehlivé analytické metody pro jejich stanovení v souladu s regulačními požadavky.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem sdělení bylo demonstrovat schopnost kolony Accucore Phenyl-Hexyl (2,6 µm) dosáhnout chromatografického rozlišení šesti β-agonistů (terbutalin, cimaterol, salbutamol, ractopamin, clorprenalin, clenbuterol) v chromatografickém čase 6 minut při detekci LC/MS. Studie představuje konfiguraci přístrojového vybavení a optimalizaci mobilní fáze pro robustní a rychlou analýzu.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorek: Standardní směs β-agonistů 10 µg/mL v methanolu/vodě (95:5 v/v), zřeďována 1:10 vodou.

Chromatografie:

• Kolona: Thermo Scientific Accucore Phenyl-Hexyl, 2,6 µm, 100×2,1 mm
• Teplota kolony: 40 °C
• Inj. objem: 1,0 µL
• Průtok: 0,25 mL/min
• Mobilní fáze A: 5 mM acetát amonný, pH 4; B: acetonitril
• Gradient: 0–1 min 5 % B; 1–10 min lineárně na 100 % B; 10,01–13 min návrat na 5 % B

Detekce:

• MS systém: Thermo Scientific MSQ
• Režim: pozitivní ESI, plný scan m/z 150–350
• Parametry: teplota sondy 450 °C, napětí 4,5 kV, kuželové napětí 60 V

Technologie kolony: Partikule o velikosti 2,6 µm s pevným jádrem a porézní vrstvou zajišťují nižší zpětné tlaky a vysokou účinnost separace. Fenylhexylová fáze kombinuje klasické RP interakce s π–π interakcemi pro zvýšenou selektivitu.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda umožnila rozdělení všech šesti β-agonistů v celkovém čase 6 minut s dobrým rozlišením špiček. Ačkoliv není dosaženo plné bazální separace, použití MS detekce zajišťuje dostatečnou selektivitu a citlivost pro splnění požadovaných LOQ. Fenylhexylová fáze prokázala synergii hydrofobních a π–π interakcí, což vedlo k vyváženému retenčnímu chování a odlišné selektivitě jednotlivých analyzovaných sloučenin.

Přínosy a praktické využití metody

Rychlá analýza šesti β-agonistů umožňuje efektivní screening potravinových vzorků a splnění regulačních požadavků. Nízký zpětný tlak dovoluje nasazení na UHPLC přístrojích bez nadměrného zatížení pumpy. Metoda je vhodná pro rutinní kontrolní laboratoře i výzkumná pracoviště.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Integrace s vysokorozlišujícími hmotnostními spektrometry (HRMS) pro rozšířenou identifikaci neznámých metabolitů.
• Vývoj vícevrstevových fází pro dosažení lepší selektivity v komplexních matricích potravin.
• Automatizace přípravy vzorků a miniaturizace metodik pro rychlejší workflow.
• Rozšíření aplikace na další skupiny veterinárních léčiv a metabolitů.

Závěr

Popisovaná LC/MS metoda s použitím Accucore Phenyl-Hexyl UHPLC kolony nabízí rychlou, robustní a selektivní separaci šesti β-agonistů v čase 6 minut. Kombinace core enhanced technologie a fenylhexylové fáze zaručuje nízké zpětné tlaky, vysokou účinnost a dostatečnou selektivitu, což je klíčové pro rutinní kontrolu reziduí v potravinách.

Reference

1. Pereira L. Analysis of β-agonists Using a Core Enhanced Technology Accucore Phenyl-Hexyl HPLC Column. Thermo Fisher Scientific Application Note ANCCSCETBETAAG, 2011.