Biosimilar Peptide Mapping Characterization and MAM Workflow Using Prototype Benchtop QTOF with an App-Based Acquisition and Data Processing Platform

Význam tématu

Peptidové mapování patří mezi klíčové metody pro charakterizaci posttranslačních modifikací (PTM) u biologických léčiv a biosimilárních produktů. Díky vysoké citlivosti a schopnosti detailně analyzovat aminokyselinovou sekvenci je tato metoda nezbytná pro zajištění kvality, bezpečnosti a účinnosti monoklonálních protilátek v souladu s GMP standardy.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo implementovat robustní workflow pro charakterizaci peptidového mapování a multiatributovou metodu (MAM) u biosimilárního infliximabu na platformě Xevo G3 QTof. Autoři porovnali inovátor (Remicade®) s třemi biosimilary (Inflectra®, Avsola®, Renflexis®), včetně analýzy pod tlakem stresu.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky procházely redukcí, alkylací a tryptickým štěpením. Následně bylo použito reverzní fázové kapalinové chromatografie spojené s hmotnostní spektrometrií (RPLC-MS) v režimu data independent acquisition (DIA, MSE) na platformě Xevo G3 QTof.

• UPLC: ACQUITY Premier UPLC System
• MS detektor: Xevo G3 QTof Mass Spectrometer
• Software: UNIFI App Peptide Mapping workflow a Peptide MAM App

Hlavní výsledky a diskuse

Analýza dosáhla více než 95% pokrytí sekvence pro všechny čtyři produkty. Mezi inovátorem a biosimilary byly pozorovány pouze drobné rozdíly v relativním zastoupení N-glykozylovaných forem (celkem detekováno 28 glykoform). Multi-atributová studie zvýraznila podobnosti i varovné odchylky v oxidačních a deamidací modifikacích. Stresová studie ukázala vysokou stabilitu testovaných vzorků, s průměrným RSD ~2 % při opakovaných analýzách.

Přínosy a praktické využití metody

Workflow založený na Xevo G3 QTof v kombinaci se softwarovým balíkem waters_connect poskytuje integrované řešení pro:

• Rychlou a automatizovanou akvizici dat
• Efektivní redukci šumu a optimalizaci velikosti souborů
• Spolehlivou detekci PTM a sledování kritických kvalitativních atributů

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další rozvoj automatizace a inteligentních algoritmů pro analýzu komplexních biologických vzorků. Integrace strojového učení do MAM workflow může posílit schopnost detekovat vzácné modifikace. Platformy jako waters_connect se budou vyvíjet směrem k plně cloudovým řešením s kolaboračním přístupem k datům.

Závěr

Studie prokázala, že kombinace peptidového mapování a MAM na Xevo G3 QTof je vhodná pro komplexní charakterizaci biosimilárních monoklonálních protilátek. Metoda umožňuje detailní srovnání PTM, sledování stability a splnění přísných GMP požadavků. Díky vysoké opakovatelnosti a robustnosti představuje cenný nástroj pro vývoj a kontrolu kvality biofarmaceutických produktů.

Reference

DeLaney K., Ippoliti S., Reid L. et al. Biosimilar Peptide Mapping Characterization and MAM Workflow Using Prototype Benchtop QTOF. Waters Corporation, 2022.