Extraction of Amphetamine and Designer Amphetamine Analogues from Whole Blood Using ISOLUTE® SLE+ Prior to GC/MS Analysis

Význam tématu

Detekce amfetaminů a jejich analogů v celém krevním vzorku je klíčová v toxikologii, forenzní analýze i klinických studiích. Rychlý, spolehlivý a reproduceovatelný postup přípravy vzorku zlepšuje kvalitu výsledků a zkracuje čas analýzy, což je zásadní pro vysokou propustnost laboratoří a v situacích vyžadujících urgentní reakci.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo vyvinout a validovat postup pro současnou extrakci amfetaminů, jejich derivátů a dalších látek z krevního vzorku pomocí podpory kapalně-kapalné extrakce (ISOLUTE SLE+). Studie hodnotila:

• Účinnost extrakce amfetaminů, mefedronu, MDMA a dalších analogů.
• Možnost simultánní extrakce dalších skupin látek (barbituráty, benzodiazepiny, kokain, opiáty).
• Srovnání dvou elučních rozpouštědel: MTBE versus dichlormethan.

Použitá instrumentace

• Kolony ISOLUTE SLE+ 1 mL (Biotage)
• GC: Agilent 7890A s kapilární kolónou DB-5 (30 m × 0,25 mm × 0,25 µm)
• MSD: Agilent 5975C v režimu vybraných iontů (SIM)
• TurboVap LV a SPE Dry koncentrační systémy pro odpar rozpouštědel

Metodika extrakce a příprava vzorku

1. Přídavek interního standardu (IS) do 1 mL plné krve (100 ng/mL).
2. Úprava pH přidáním 1 mL 1 % NH₄OH a vortex 30 s.
3. Naložení 750 µL upraveného vzorku na SLE+ kolonu, gravitace 5 min.
4. Eluce dvěma 2,5 mL aliquotami MTBE (nebo DCM) za gravitačního průtoku, zachytávání do zkumavky s 0,2 M HCl v methanolu (100 µL).
5. Odpar eluátu proudem vzduchu nebo dusíku při room temperature.
6. Derivátace směsí ethyl­acetátu a pentafluoropropionanhydridu (PFPA) při 70 °C po dobu 20 min.
7. Finální reconstitution v ethyl­acetátu před GC/MS analýzou.

Hlavní výsledky a diskuse

• Obě eluce (MTBE, DCM) poskytují obnovy 70–100 % s RSD <10 %.
• Simultánní extrakce dalších drog je možná při použití DCM bez ztráty selektivity pro amfetaminy.
• Lineárnost kalibračních křivek v rozsahu 10–500 ng/mL s koeficienty determinace r² 0,9939–0,9999.
• LLOQ pro hlavní analyty dosahuje 10–50 ng/mL, u některých derivátů již 10 ng/mL.

Přínosy a praktické využití metody

Vývojový postup eliminuje potřebu srážení bílkovin, minimalizuje emulze a úniky matrixových interferentů. Vysoká propustnost a možnost multiplexní extrakce usnadňují implementaci v forenzních a klinických laboratořích, stejně jako v průmyslové QA/QC.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další automatizace SLE+ procesů na platformách pro vysokoprůchodové zpracování vzorků, rozšíření na nové psychoaktivní látky (NPS) a integrace s LC-MS/MS. Trendem je také používání ekologičtějších rozpouštědel a miniaturizace metod pro nanosklidní vzorků.

Závěr

Validated procedure using ISOLUTE SLE+ columns delivers rapid, clean and reproducible extraction of amphetamine‐type stimulants and designer analogues from whole blood. The method’s flexibility, high recoveries and low LLOQs make it suitable for routine toxicology and forensic applications.

Reference

• Biotage Application Note AN855: Extraction of Amphetamine and Designer Amphetamine Analogues from Whole Blood by ISOLUTE SLE+, 2015.