Extraction of Benzodiazepines from Whole Blood Using ISOLUTE® SLE+ Prior to GC/MS Analysis

Význam tématu

Analýza benzodiazepinů v krevním séru je klíčová v toxikologii a forenzní medicíně. Rychlé a spolehlivé stanovení těchto psychoaktivních látek napomáhá diagnostice, monitoringu i právním řízením.

Cíle a přehled studie

Hlavním cílem studie bylo vyvinout jednoduchou, efektivní metodu extrakce benzodiazepinů z celkové krve pomocí ISOLUTE SLE+ sloupců a vyhodnocení výkonu pro GC/MS analýzu. Studie zároveň zkoumala možnost simultánního extrahování dalších tříd drog (amfetaminy, barbituráty, opiáty, kokain a metabolity).

Použitá metodika a instrumentace

Pro předúpravu vzorku se 1 mL krve obohacené o vnitřní standard (Diazepam-D5, 100 ng/mL) alkalizovalo 1 % roztokem amoniaku a naložilo se 750 µL na ISOLUTE SLE+ sloupec (kapacita 1 mL). Extrakce probíhala dvěma 2,5 mL dávkami dichlormetanu (alternativa MTBE) za gravitačního průtoku a lehkého podtlaku. Extrakt se koncentroval pomocí TurboVap LV, znovu natavil v etylacetátu a provedla se derivatizace MTBSTFA na bloku při 70 °C.
Seznam hlavní instrumentace:

• Agilent 7890A GC s QuickSwap a DB-5 kolonkou (30 m × 0,25 mm × 0,25 µm)
• Agilent 5975C MSD v SIM režimu
• SLE kolony ISOLUTE SLE+ 1 mL
• TurboVap LV pro koncentraci extraktů
• Blokový ohřev pro derivatizaci

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda poskytla čisté extrakty s vysokými výtěžky (>80 %), relativní standardní odchylka (RSD) pod 10 % a LLOQ už od 10 ng/mL pro vybrané analyty. Kalibrační křivky vykázaly koeficient determinace (r2) mezi 0,9922 a 0,9999. Obě extrakční rozpouštědla (DCM i MTBE) prokázala obdobnou účinnost, přičemž DCM byla preferována při souběžném stanovení kokainu.

Přínosy a praktické využití metody

• Jednoduchá předúprava bez nutnosti precipitace bílkovin
• Vyšší propustnost laboratorních procesů a snížené riziko emulzí
• Možnost simultánního stanovení různých tříd psychoaktivních látek
• Vysoká citlivost a reprodukovatelnost vhodná pro QA/QC i forenzní laboratoře

Budoucí trendy a možnosti využití

Automatizace extrakce s využitím tabless formátu sloupců, rozšíření metody na další analytické třídy, aplikace ekologičtějších rozpouštědel, integrace on-line SLE s hmotnostní spektrometrií a miniaturizace procesů pro klinické a forenzní workflow.

Závěr

ISOLUTE SLE+ extrakce benzodiazepinů z celkové krve poskytuje rychlou, robustní a citlivou platformu pro GC/MS analýzu s vynikajícími výtěžky, přesností a opakovatelností, vhodnou pro rutinní i forenzní použití.

Reference

• Biotage. Application Note AN854, 2015