Determination of Pregabalin in Human Plasma by SPE-LC-MS/MS Using Thermo Scientific SOLA CX Mixed Mode Solid Phase Extraction Cartridges and a Thermo Scientific Accucore PFP HPLC Column

Význam tématu

Urychlené a spolehlivé stanovení koncentrace pregabalinu v lidské plazmě je klíčové pro farmakokinetické studie, terapeutické monitorování a bezpečnostní farmakologii. Pregabalin se používá při neuropatické bolesti, fibromyalgii a některých typech epilepsie a jeho analýza v biologických vzorcích vyžaduje citlivou a selektivní metodiku, která překoná interferenci ze složitých biologických matric.

Cíle a přehled studie

Hlavním cílem studie bylo ověřit výkonnost materiálu SOLA CX pro extrakci pregabalinu ze vzorků lidské plazmy a jeho následné stanovení pomocí LC-MS/MS na obrácené fázové chromatografii s použitím Accucore PFP kolony. Gabapentin sloužil jako vnitřní standard pro kontrolu přesnosti a opakovatelnosti.

Použitá metodika a instrumentace

Matrice: lidská plazma nasycená pregabalinem (1–250 ng/mL) a gabapentinem (100 ng/mL).
Solid phase extraction:

• Kartridž: Thermo Scientific SOLA CX 10 mg/1 mL.
• Stadia: kondicionace (0,5 mL methanol), equilibrace (0,5 mL voda+1 % HCOOH), naložení vzorku, dvě fáze promytí (voda+1 % HCOOH; methanol+1 % HCOOH), eluční fáze (methanol+2 % NH4OH).
• Sušení dusíkem (40 °C), rekonstituce v 250 µL 50:50:0,1 voda/methanol/FA.

Chromatografie:

• Přístroje: Thermo Scientific Accela 1250 pumpa, Accela Open autosampler, kolona Accucore PFP 2,6 µm (50 × 2,1 mm).
• Mobilní fáze: A – voda+0,1 % FA, B – methanol+0,1 % FA; gradient 20→60→90→20 % B v čase 0–5 min; průtok 0,4 mL/min; injekce 10 µL; doba analýzy 5 min.

Detekce:

• MS/MS: Thermo Scientific TSQ Vantage, HESI pozitivní ionizace; SRM prekurzor→produkt 160,1→55,1 pro pregabalin (CE 22), 172,1→95,1 pro gabapentin (CE 22).
• Parametry: spray 3500 V, vaporizér 150 °C, kapilára 250 °C, tlak srážkové buňky 1,5 mTorr.

Hlavní výsledky a diskuse

Linearity: výborná linearita v intervalu 1–250 ng/mL (r2 = 0,999) za 1/x vážené regrese. LLOQ dosahuje 1 ng/mL se S/N = 198. Precision: opakovatelnost u střední koncentrace (75 ng/mL) s %CV = 2,78. Recovery: 91,4 % při 75 ng/mL. Matrix effect: −7,0 %, což indikuje minimální potlačení signálu. Chromatogramy potvrzují dobrou separaci od endogenních interferentů.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda poskytuje rychlou (5min) a automatizovatelnou proceduru s nízkou spotřebou organických rozpouštědel a vysokou reproducibilitou. Je snadno přenosná do klinických laboratoří a vhodná pro vysokoprůchodovou bioanalytiku, terapeutické monitorování i farmakovigilanční studie.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další vývoj by mohl zahrnovat vícekolejné SPE systémy pro zkrácení doby přípravy vzorků, aplikaci na další sloučeniny v neuropatické terapii a integraci s automatizovanými mikrofly-at-systémy. Vzniká prostor pro multi-analyty v jediné LC-MS/MS metodě pro komplexní monitoring antikonvulziv.

Závěr

Popsaná SPE-LC-MS/MS metoda s materiálem SOLA CX a PFP kolonou dosahuje požadované citlivosti, specifity a rychlosti pro stanovení pregabalinu v lidské plazmě. Kombinace jednoduché přípravy vzorku a robustní detekce zabezpečuje spolehlivé výsledky v souladu s FDA kritérii.

Reference

1. National Library of Medicine. MedlinePlus Drug Information: Pregabalin. [online] Dostupné z: http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/druginfo/meds/a605045.html
2. Therapeutic Advances in Chronic Disease. November 2010;1(4):141–148.
3. FDA Guidance for Industry. Bioanalytical Method Validation. 2001. [online] Dostupné z: http://www.fda.gov/downloads/Drugs/GuidanceComplianceRegulatoryInformation/Guidances/ucm070107.pdf