LC-MS/MS Method for the Determination of HCTZ and Losartan from Human Plasma Using SOLA CX

Význam tématu

Solid-phase extraction (SPE) je klíčová metoda při bioanalytické separaci a stanovení terapeutických látek v komplexních vzorcích. Spolupráce inovativních SPE kazet SOLA CX a rychlé chromatografie na kolónách Accucore aQ umožňuje citlivé a reprodukovatelné analýzy se zkrácenou dobou zpracování a sníženou spotřebou vzorku a rozpouštědel.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout a validovat LC-MS/MS metodu pro kvantifikaci hydrochlorothiazidu (HCTZ) a losartanu v lidské plazmě. Metoda kombinuje extrakci pomocí SOLA CX kazet, rychlou chromatografickou separaci na Accucore aQ kolóně a detekci termálním HESI ionizačním zdrojem.

Použitá metodika a instrumentace

Metodika extrakce zahrnovala kondicionování SOLA CX kazety (1 mL methanolu, 1 mL vody), aplikaci 100 µL vzorku, mytí vodou s 0,1 % kyselinou formiovou a eluování acetonitrilem s 3 % amoniaku. Suché zbytky byly rekonstituovány v 100 µL 80:20 vody/acetonitrilu.
Chromatografie probíhala na Accucore aQ kolóně (50 × 2,1 mm, 2,6 µm) s gradientem 20–70 % organické fáze za 2 minuty při průtoku 0,4 mL/min a teplotě 40 °C.
MS/MS detekce byla realizována na Thermo Scientific TSQ Vantage s HESI, polaritou + pro losartan a – pro HCTZ, detekčními přechody m/z 295→205 pro HCTZ a 423→269 pro losartan.

Použitá instrumentace

• Thermo Fisher Scientific Accela 600 LC
• Accucore aQ kolóna, 2,6 µm, 50 × 2,1 mm
• Thermo Scientific SOLA CX SPE kazety 10 mg/1 mL
• Thermo Scientific TSQ Vantage MS/MS
• SPE pozitivní tlakový manifold a Ultra-Vap
• Software Thermo Scientific LC QUAN

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda prokázala lineární rozsah 0,5–500 ng/mL s koeficienty korelace r2 0,9974 pro HCTZ a 0,9956 pro losartan. Precision byl < 6,1 % RSD, průměrné recoveries dosáhly 86,4 % (HCTZ) a 65,8 % (losartan). Pro HCTZ nebyl pozorován carryover, u losartanu bylo nutné analyzovat dvakrát blank vzorek po nejvyšším standardu.

Přínosy a praktické využití metody

Dvouminutová analýza šetří čas a náklady na rozpouštědla, snižuje objem vzorku a zvyšuje laboratorní průtoknost. Metoda je vhodná pro bioanalytiku, klinické studie a farmakovigilanci.

Budoucí trendy a možnosti využití

Rozšíření aplikace na další polarické léky a metabolity, integrace s automatizovanými platformami pro vysokoproduktové laboratoře, vývoj další generace SPE produktů a kolón pro rychlé analýzy.

Závěr

Kombinace SOLA CX SPE kazet a Accucore aQ kolóny umožňuje rychlé, citlivé a reprodukovatelné stanovení HCTZ a losartanu v lidské plazmě s nízkou spotřebou vzorku a rozpouštědel.