LC-MS/MS Method for the Determination of HCTZ and Losartan from Human Plasma Using SOLA CX

Význam tématu

Správná a citlivá analýza hydrochlothiazidu (HCTZ) a losartanu v lidské plazmě je klíčová pro monitorování léčby hypertenze a farmakokinetické studie. Kombinace rychlého spektrálně čistého SPE čištění a rychlé chromatografické separace přispívá k vyšší efektivitě provozu klinických a bioanalytických laboratoří.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem bylo vyvinout a validovat dvouminutovou LC-MS/MS metodu pro simultánní stanovení HCTZ a losartanu v lidské plazmě s využitím inovativních SOLA CX SPE kazet a akcelerované chromatografie na sloupci Accucore aQ.

Použitá metodika

Vzorky plazmy byly spiked standardy a interním kalibračním činidlem, poté extrahovány na SPE kazetách SOLA CX. Postup zahrnoval:

• kondicionaci kazety (1 mL methanolu, 1 mL vody),
• nadání vzorku (100 µL plazmy se standardy),
• promytí (200 µL vody s 0,1 % kyselinou mravenčí),
• eluční fázi (200 µL acetonitrilu s 3 % amoniaku),
• odpaření eluátu a rekonstituci v 100 µL roztoku voda/acetonitril (80:20, v/v).

Chromatografie probíhala na sloupci Accucore aQ (50×2,1 mm, 2,6 µm) při 40 °C s gradientem 20–70 % organické fáze v čase 0–2 min (0,4 mL/min). Detekce byla prováděna v MS/MS přístroji s HESI ionizací.

Použitá instrumentace

• SPE kazety: Thermo Scientific SOLA CX 10 mg/1 mL
• HPLC systém: Thermo Scientific Accela 600
• Chromatografický sloupec: Accucore aQ 50×2,1 mm, 2,6 µm
• Mass spektrometr: Thermo Scientific TSQ Vantage s HESI
• SPE pozitivní tlakový manifold a odpařovací systém Thermo Scientific Ultra-Vap

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda prokázala vysokou linearitu v rozsahu 0,5–500 ng/mL (r2 > 0,995). Preciznost byla < 6,1 % RSD u obou analyzovaných látek. Průměrné zotavení činilo 86,4 % pro HCTZ a 65,8 % pro losartan. Separace proběhla za 2 minuty s dobrým tvarem píků a nízkým pozadím. Nedocházelo k významnému carry-over u HCTZ, u losartanu bylo potvrzeno nutné vyplachování blanky.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje výrazné zkrácení doby analýzy, snížení spotřeby vzorku a organických rozpuštědel a zajišťuje reprodukovatelné výsledky v rámci vysokoprostorových bioanalytických laboratoří. Jednoduchá příprava vzorků bez složitých postupů usnadňuje validaci a rutinní nasazení v klinických studiích.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další rozšíření využití SPE kazet SOLA CX pro širší škálu polarních a středně polárních analyz, integrace s plně automatizovanými systémy zpracování vzorků a přechod na miniaturizované formáty pro zvýšení throughput v preklinickém i klinickém prostředí.

Závěr

Popsaná LC-MS/MS metoda s využitím SOLA CX a Accucore aQ pro stanovení HCTZ a losartanu v lidské plazmě nabízí rychlé, citlivé a reprodukovatelné řešení, které snižuje náklady i spotřebu rozpouštědel a je vhodné pro vysokoprostorovou bioanalytiku.

Reference

Žádné externí literární odkazy nebyly v textu uvedeny.