Increasing Recovery of Phosphorylated Peptides Using ACQUITY PREMIER Technology Featuring MaxPeak High Performance Surfaces

Význam tématu

Analýza fosforylovaných peptidů je klíčová v biochemii a farmaceutickém průmyslu. Interakce fosfátových skupin s kovovými povrchy LC systému vede k absorpci, špatnému tvaru špiček a snížené reprodukovatelnosti, což při stopových koncentracích ztěžuje kvantifikaci a snižuje citlivost metod.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem studie bylo otestovat, jak ACQUITY PREMIER Solution s MaxPeak High Performance Surfaces (HPS) technologiemi zlepšuje zachycení a tvar špiček fosforylovaného peptidu při nízkých koncentracích. Provedeno srovnání tří konfigurací systému:

• Konvenční LC systém s nerezovou ocelí
• Konvenční LC systém s ACQUITY PREMIER Column
• ACQUITY PREMIER Solution s MaxPeak HPS kolonkou

Použitá metodika

Vzorek obsahoval singly fosforylovaný peptid VNQIGpTLSESIK (3 pmol/µL), separace prováděna reverzní fází UHPLC s gradientem 1,85 % B/min (voda/0,1 % FA vs. acetonitril/0,1 % FA). Injekční objem 2 µL. Detekce pomocí single quadrupole QDa v módu SIR při m/z 685,0.

Použitá instrumentace

Pro separaci a detekci byly použity:

• ACQUITY PREMIER System s UPLC CSH C18 kolonkou (130 Å, 1,7 µm, 2,1×100 mm)
• ACQUITY PREMIER Column s MaxPeak HPS technologií
• ACQUITY QDa Mass Detector
• Empower 3.0 pro zpracování dat

Hlavní výsledky a diskuse

V konvenčním systému došlo k výraznému protahování špičky a maximálnímu signálu ~1,1×10^6 iontů. V systému s MaxPeak HPS se signál zvýšil až 8× (9,3×10^6 iontů) a v plně Premier řešení až 10× (1,1×10^7 iontů). Peak area ukázala dvojnásobné zvýšení u samotné HPS kolonky a další ~25% nárůst při použití kompletní Premier konfigurace, což dokládá snížení adsorpčních ztrát a zlepšení návratnosti při stopových úrovních.

Přínosy a praktické využití metody

Zlepšení kvality dat a produktivity laboratoře díky:

• Zvýšené návratnosti stopových analyzátů
• Omezování kovově indukovaného protahování špiček
• Lepší reprodukovatelnosti a citlivosti měření

Budoucí trendy a možnosti využití

Technologie HPS se může dále prosadit:

• Rozšíření na jiné kovy citlivé analytéty (karboxyláty, cukry)
• Integrace do QC procesů v biotechnologii a farmaceutickém průmyslu
• Vývoj povrchových úprav pro různé typy kolonek a kapilár

Závěr

ACQUITY PREMIER Solution s MaxPeak HPS účinně řeší adsorpční ztráty kovově citlivých analytů, zlepšuje návratnost, tvar špiček a reprodukovatelnost v LC–MS analýzách fosforylovaných peptidů, což vede k vyšší produktivitě a spolehlivosti výsledků.