Increasing Recovery and Chromatographic Performance of “Acidic” Peptides Using Waters ACQUITY PREMIER Solution

Význam tématu

V kapalné chromatografii může nedokonalá povrchová úprava kovového hardware vést k nežádoucí adsorpci analyzovaných peptidů, což se projevuje špatným tvarem píku, tailingem a nízkou návratností analytů. Tyto jevy zvyšují variabilitu výsledků, snižují citlivost detekce a mohou negativně ovlivnit vývoj a kontrolu biofarmaceutických produktů založených na peptidech.

Cíle a přehled studie

Studie hodnotila řešení ACQUITY PREMIER s technologií MaxPeak High Performance Surfaces (HPS) při analýze „kyselého“ peptidu T14 (pI=3,9), známého svou náchylností k adsorpci na kovové povrchy. Srovnávaly se tři konfigurace LC systému:

• konvenční systém s nerezovým hardwarem,
• konvenční systém s PREMIER kolónou,
• integrované řešení ACQUITY PREMIER systém + kolóna s MaxPeak HPS.

Použitá instrumentace

Pro chromatografii byla využita reálná reverzní fáze se gradientem 0,68 % B/min (A: voda + 0,1 % kyseliny formiové, B: acetonitril + 0,1 % kyseliny formiové). Spektrální data sbírala high-res mass-spec SYNAPT XS ve full scan a MSE režimu, zpracování proběhlo v UNIFI Scientific Information System. Součástí porovnání byl ACQUITY UPLC H-Class Bio Binary PLUS systém s CSH C18 kolónou pro variantu konvenčního hardware.

Hlavní výsledky a diskuse

Výsledky demonstrovaly zásadní zlepšení chromatografické výkonnosti:

• Signál v MS detektoru stoupl až 34× oproti konvenčnímu zařízení.
• Plocha píku se zvýšila až 4×, čímž se prokázala vyšší návratnost peptidu.
• Z počtu detekovaných b/y fragmentů při MSE analýze se počet zvýšil z 11 na 36, což zvyšuje spolehlivost identifikace.

Technologie MaxPeak HPS významně snižuje interakce peptidů s kovovými povrchy, čímž minimalizuje tailing a ztráty analytu.

Přínosy a praktické využití metody

Řešení ACQUITY PREMIER s MaxPeak HPS přináší laboratorím:

• vyšší produktivitu díky snížené potřeby optimalizace metod,
• lepší reprodukovatelnost a přesnost kvantifikace peptidů,
• vyšší kvalitu dat a důvěryhodnost v peptide mapping a QC procesy biofarmaceutik.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření povrchových úprav do dalších typů LC hardware a kolón pro široké spektrum citlivých biomolekul. Vývoj nových bariérových vrstev a aplikace v on-line bioprocesní kontrole či multi-omics analýzách slibují další zlepšení výkonu a robustnosti analytických procesů.

Závěr

ACQUITY PREMIER Solution s technologií MaxPeak HPS prokázalo výrazné zvýšení návratnosti, ostrosti a reprodukovatelnosti analýzy kyselých peptidů v LC-MS. Integrace povrchově modifikovaného hardware umožňuje výkonnější a spolehlivější biomolekulární analýzy, což je klíčové pro vývoj a výrobu biopharma produktů.