A Sensitive LC/MS/MS Method for the Quantitation of Telmisartan in Human Plasma using the Agilent 6460 Triple Quadrupole LC/MS with Jet Stream Technology

Význam tématu

Analýza telmisartanu v lidské plazmě je klíčová pro farmakokinetické studie nízkých dávek, monitorování účinnosti léčby hypertenze a hodnocení safety. Díky nízkým plazmatickým koncentracím po malých dávkách vyžaduje metoda vysokou citlivost, specifičnost a robustnost.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout citlivou LC/MS/MS metodu schopnou kvantifikovat telmisartan v rozmezí 50–5000 pg/mL. Využita byla Agilent 1260 Infinity LC spojená s 6460 Triple Quadrupole LC/MS systémem s technologií Jet Stream.

Použitá metodika a instrumentace

Metodika zahrnovala:

• Příprava vzorku: proteinová precipitace studeným acetonitrilem, vysušení, rekonstituce v 9:1 (v/v) voda/methanol.
• Standardy: telmisartan a telmisartan-d3 v metanolu, příprava kalibračních roztoků 0,5–50 ng/mL, následné naředění do plazmatických standardů 50–5000 pg/mL.
• Chromatografie:
  
  • Kolona: ZORBAX RRHT Eclipse Plus-C8 (3×50 mm, 1,8 μm), 45 °C.
  • Mobilní fáze: 10 mM acetát amonný (A) a acetonitril (B), 0,5 mL/min, gradient 2→95 % B za 0,5 min, držení 2 min, návrat na 20 % B.
• Hmotnostní spektrometrie:
  
  • Režim: ESI pozitivní, Agilent Jet Stream.
  • Přechody (MRM): telmisartan 515.2→275.6 (CE 52 V), telmisartan-d3 518.4→279.2 (CE 50 V).
  • Podmínky: sušící plyn 10 L/min při 350 °C, obalový plyn 11 L/min při 400 °C, tlak nebulizéru 40 psi, kapilární napětí 4000 V.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda dosáhla dolní mez kvantifikace (LLOQ) 50 pg/mL, což představuje o řád lepší citlivost než dříve publikované techniky (0,5 ng/mL). Lineární kalibrační křivky v rozsahu 50–5000 pg/mL vykázaly R2 ≥ 0,9968. Preciznost (RSD) se pohybovala do ~11 % a přesnost mezi 87–103 % pro kalibrační standardy a QC vzorky.

V carry-over testech nebyly detekovány významné stopy analyty v následujících blank vzorcích po ULOQ, splněny byly FDA kritéria pro bioanalytické metody.

Přínosy a praktické využití metody

Vyvinutá metoda nabízí:

• Vysokou citlivost vhodnou pro nízkodávkované farmakokinetické studie.
• Jednoduchou přípravu vzorků proteinovou precipitací.
• Robustní linearitu a reprodukovatelnost.
• Možnost rychlého zpracování vzorků v klinických laboratořích.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekávané směry rozvoje zahrnují:

• Rozšíření metody na multiplexní analýzu více antihypertenziv současně.
• Miniaturizaci přípravy vzorků a automatizaci pro vysokoprodukční laboratoře.
• Použití pokročilých ionizačních technologií pro další zvýšení citlivosti.
• Implementaci metodiky v preklinických studiích a terapeutickém monitoringu.

Závěr

Vysoce citlivá LC/MS/MS metoda s Agilent 6460 Triple Quadrupole LC/MS a Jet Stream technologií umožňuje spolehlivou kvantifikaci telmisartanu v lidské plazmě od 50 pg/mL. Metoda překonává dřívější postupy v citlivosti, splňuje regulační požadavky na přesnost a preciznost a je vhodná pro klinické a farmakokinetické aplikace.

Reference

1. Li P., Wang Y., Tang Y., Fawcett J.P., Cui Y., Gu J. Determination of telmisartan in human plasma by liquid chromatography-tandem mass spectrometry. J. Chromatogr. B. 828 (2005) 126–129.
2. Yan T., Li H., Deng L., Guo Y., Yu W., Fawcett J.P., Zhang D., Cui Y., Gu J. Liquid chromatographic-tandem mass spectrometric method for the simultaneous quantitation of telmisartan and hydrochlorothiazide in human plasma. J. Pharm. Biomed. Anal. 48 (2008) 1225–1229.