A High Sensitivity LC/MS/MS Method for Quantitative Determination of Telmisartan in Human Plasma

Význam tématu

Telmisartan je široce používaný antagonista angiotenzinových receptorů II s významným uplatněním při léčbě hypertenze a srdečního selhání. Spolehlivá kvantitativní bioanalýza telmisartanu v lidské plazmě je klíčová pro farmakokinetické, bioekvivalenční a toxikologické studie. Vysoká citlivost a selektivita metod LC–MS/MS umožňují monitorovat nízké koncentrace léčiva, což je zásadní pro přesné vyhodnocení dávkování a bezpečnosti léčby.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem práce bylo vyvinout vysoce citlivou a robustní analytickou metodu pro kvantitativní stanovení telmisartanu v lidské plazmě bez nutnosti složitého čištění SPE. Studie popisuje validaci metody na přístroji Shimadzu LCMS-8050 se zdokonaleným vyhřívaným ESI interfacem a zdůrazňuje jednoduchý postup s jen proteinovou precipitací pro dosažení LLOQ 4 pg/mL ve vzorku plazmy.

Použitá metodika a instrumentace

Systém:

• Shimadzu LCMS-8050 s vyhřívaným ESI, Nexera UHPLC
• ZORBAX Eclipse Plus C18 kolona (3,0 mm × 100 mm, 1,8 μm)

Podmínky chromatografie:

• Izokratická eluce: 40 % vodný eluens / 60 % acetonitril + 0,04 % kyseliny mravenčí
• Průtok 0,4 mL/min, teplota kolony 50 °C

Příprava vzorku:

• Přidání internal standardu (irbesartan) k plasma pool
• Proteinová precipitace acetonitrilem v poměru plazma : ACN = 1 : 3
• Centrifugace a filtrace 0,2 μm nylonovým filtrem

Detekce MRM:

• Telmisartan přechody m/z 515,2 → 276,1 (kvantitativní), 515,2 → 497,2 (kvalifikační)
• Irbesartan přechody m/z 429,2 → 207,0 (kvantitativní), 429,2 → 195,1 (kvalifikační)

Hlavní výsledky a diskuse

Lineárnost a citlivost:

• Lineární rozsah 1–2000 pg/mL, R² > 0,999
• LLOQ 1 pg/mL (S/N > 10), odpovídá 4 pg/mL před precipitací

Přesnost a opakovatelnost:

• QC1 (5 pg/mL): přesnost 93,8 %, RSD 3,2 %
• QC2 (20 pg/mL): přesnost 123,5 %, RSD 2,3 %
• LLOQ: přesnost 82,8 %, RSD 13,3 %

Další pozorování:

• Ion enhancement na všech úrovních koncentrace
• Drobný interferenční pik z plazmy v blízkosti retenční doby telmisartanu

Přínosy a praktické využití metody

Metoda nabízí výrazné zjednodušení přípravy vzorku, snížení nákladů a zvýšení propustnosti laboratoře díky eliminaci SPE. Dosahuje vysoké citlivosti a dostatečné robustnosti pro preklinické i klinické farmakokinetické studie. Umožňuje rychlou analýzu většího počtu vzorků s minimálním provozním zásahem.

Budoucí trendy a možnosti využití

Metoda lze rozšířit a optimalizovat v následujících oblastech:

• Validace pro klinické diagnostické nasazení
• Automatizace přípravy vzorků a integrace s robotickými systémy
• Rozšíření na další biologické matrice (moč, tkáně)
• Využití mikroprůtokových chromatografických technik pro další zvýšení citlivosti
• Implementace MRM³ nebo vysokorozlišovací hmotnostní spektrometrie pro vyšší selektivitu

Závěr

Vyvinutá metoda LC–MS/MS využívající pouze proteinovou precipitaci poskytuje robustní a vysoce citlivý nástroj pro kvantifikaci telmisartanu v lidské plazmě. S dosaženou LLOQ 4 pg/mL je vhodná pro farmakokinetické a bioekvivalenční studie se zvýšenou efektivitou a nižšími provozními náklady.

Reference

• Application News AD-0077: High Sensitivity LC/MS/MS Method for Quantitative Determination of Telmisartan in Human Plasma, Shimadzu (2015)