An LC-MS Clinical Research Method for Measuring Male Androgens in Serum

Význam tématu

Měření hladin mužských androgenních hormonů v séru je klíčové pro přesné stanovení hormonálního stavu. Většina klinických laboratoří se omezuje na testosteron, zatímco další významné steroidy, jako androstenedion, dihydrotestosteron a dehydroepiandrosteron, poskytují komplexnější obraz androgenní aktivity.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout rychlou a citlivou LC-MS/MS metodu využívající online tuhé fáze pro simultánní stanovení čtyř androgenních steroidů (testosteron, androstenedion, dihydrotestosteron a dehydroepiandrosteron) v malém objemu séra (100 µL) bez nutnosti složité derivatizace a dlouhé chromatografie.

Použitá metodika a instrumentace

Pro úpravu vzorku se do séra přidával síran zinečnatý a acetonitril s deuterovanými interními standardy, poté následovala centrifugace. Extrakce probíhala online na C18 SPE cartridgi v ACQUITY Online Sample Manageru. Chromatografie byla prováděna na kolonce ACQUITY UPLC HSS SB C18 (2,1 × 50 mm, 1,8 µm) s gradientem methanolu (50→70 % s 0,05 % kyseliny mravenčí) při průtoku 0,45 mL/min. Detekce se uskutečnila na Xevo TQ-S v pozitivním iontovém módu s kvantifikačními a kvalifikačními MRM přechody pro každý analyty.

Hlavní výsledky a diskuse

Chromatograme ukázaly dostatečné rozlišení všech čtyř steroidů během 6,5 minuty na vzorek. Ionický potlačení bylo minimální. Kalibrační křivky byly lineární s koeficientem r2>0,99 až do 50 nmol/L (T, A4, DHEA) a 5 nmol/L (DHT). Meze kvantifikace (LLOQ) dosáhly 0,1 nmol/L pro testosteron, androstenedion i dihydrotestosteron a 1,0 nmol/L pro dehydroepiandrosteron. Průměrné výtěžky extrakce se pohybovaly mezi 91–101 %. Porovnání s existujícími jednou analytními metodami prokázalo výbornou korelaci bez významných biasů.

Přínosy a praktické využití metody

• Simultánní stanovení čtyř androgenních steroidů v jednom běhu
• Minimální objem vzorku (100 µL séra)
• Žádná derivatizace a jednoduchá příprava
• Vysoká analytická citlivost a reprodukovatelnost
• Krátký čas analýzy (~6,5 min/sample) umožňující vysokou průchodnost

Budoucí trendy a možnosti využití

Metoda lze rozšířit o další steroidní metabolity a aplikovat v klinických studiích, personalizované medicíně a rutinním screeningu. Integrace s vyšší mírou automatizace a rozvojem rychlejších hmotnostních spektrometrů může dále zvýšit propustnost a přesnost analýzy.

Závěr

Popsaná LC-MS/MS metoda s online SPE představuje efektivní nástroj pro komplexní profilaci androgenních hormonů v séru, kombinuje malý objem vzorku, rychlou analýzu, vysokou citlivost a reprodukovatelnost a je vhodná pro nasazení ve výzkumných i klinických laboratořích.

Reference

Žádné specifické literární zdroje uvedeny.