Analysis of Corticosteroids and Androgens in Serum for Clinical Research

Význam tématu

Steroidní hormony hrají klíčovou roli v regulaci metabolismu, krevního tlaku, zánětlivých procesů a pohlavních znaků. Přesné a selektivní stanovení kortikosteroidů a androgenů je zásadní pro klinický výzkum poruch biosyntézy steroidů a pro monitoring terapeutických zásahů.

Cíle a přehled studie / článku

Metoda byla vyvinuta za účelem simultánního stanovení osmi steroidních hormonů v lidském séru: testosteronu, androstenedionu, 17-hydroxyprogesteronu, DHEAS, kortizolu, 11-deoxykortizolu a 21-deoxykortizolu. Cílem bylo zajistit analytickou citlivost, selektivitu, reprodukovatelnost a kompatibilitu s automatizovanou přípravou vzorků pro klinický výzkum.

Použitá metodika a instrumentace

• Extrakce: Oasis PRiME HLB µElution Plate, 100 µl séra, přídavek isotopově značených interních standardů, odmytí a eluční fáze pro minimalizaci interferencí.
• Chromatografie: ACQUITY UPLC I-Class System s HSS T3 VanGuard pre-column a kolona HSS T3, teplota 50 °C, tok 0,6 ml/min, gradient 4,7 minuty.
• Detekce: Xevo TQ-S micro Mass Spectrometer v režimu Multiple Reaction Monitoring (MRM) s ESI v obou polaritách.
• Automatizace: Tecan Freedom EVO 100/4 liquid handler pro přípravu vzorků a MassLynx LIMS Interface pro řízení dat.

Hlavní výsledky a diskuse

• Selektivita: Baseline separace isobarických párů (např. 11-deoxykortizol vs. 21-deoxykortizol, testosteron vs. epitestosteron).
• Sensitivita: Detekční limity ≤0,10 nmol/l pro testosteron a androstenedion, ≤0,19 nmol/l pro 17-OHP, ≥0,65 µmol/l pro DHEAS, ≤0,72 nmol/l pro deoxykortizoly, S/N >10.
• Reprodukovatelnost: Celková přesnost a opakovatelnost QC ≤7,6 % RSD napříč rozsahem koncentrací.
• Lineárnost: r2 >0,994 pro všechny analyty na rozsazích podle klinických požadavků.
• Matricový efekt: potlačený interními standardy, normalizovaný faktor 0,93–1,00 s RSD ≤6,7 %.
• Validace s EQA: Demingova regrese a Bland-Altman ukázaly průměrnou bias do ±5,8 % pro testosteron, androstenedion, 17-OHP, DHEAS a kortizol.

Přínosy a praktické využití metody

• Vysoká propustnost vzorků díky automatizaci a krátké době analýzy (<5 min).
• Minimalizace cross-reaktivity běžných imunoanalytických metod.
• Malý objem vzorku (100 µl séra) vhodný pro pediatrické a endokrinologické studie.
• Robustnost: nízká mezera carry-over a odolnost vůči běžným interferentům (lipidy, bilirubin).

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření panelu steroidů o kortikosteroidy a metabolity pro podpůrnou diagnostiku endokrinopatií.
• Integrace s klinickými LIMS a AI-nástroji pro pokročilou analýzu dat a prediktivní modely.
• Miniaturizace a přenositelná zařízení pro point-of-care testování.

Závěr

Vyvinutá LC-MS/MS metoda umožňuje rychlé, přesné a selektivní stanovení klíčových steroidních hormonů v malém objemu séra. Automatizovaná extrakce a robustní analytické parametry podporují její využití v rozsáhlém klinickém výzkumu a QA/QC laboratořích.

Reference

Nejsou uvedeny.