A Rapid and Analytically Sensitive LC-MS Method for the Simultaneous Analysis of a Panel of Steroid Hormones for Clinical Research

Význam tématu

Přesné kvantifikace steroidních hormonů jako testosteron, dehydroepiandrosteron sulfát, androstenedion a 17-hydroxyprogesteron jsou klíčové pro pochopení fyziologických i patofyziologických procesů a pro diagnostiku hormonálních poruch.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo vyvinout rychlou, reprodukovatelnou a vysoce citlivou spektrometrickou metodu pro simultánní stanovení panelu čtyř steroidních hormonů v lidském séru s minimální přípravou vzorku a krátkou dobou analýzy.

Použitá metodika a instrumentace

• Příprava vzorku: 50 µl séra, precipitace 0,4 M ZnSO₄ a acetonitril, přidání izotopově značených interních standardů.
• Online SPE: MassTrak C18 OSM cartrige, kroky podmínění, equilibrace, naložení a proplach kartridže.
• Chromatografie: ACQUITY UPLC HSS SB C18, 2,1 × 50 mm, 1,8 µm; gradient voda/methanol s 2 mM acetátem amonným a 0,1 % kyselinou mravenčí; doba analýzy 5,5 minuty.
• Detekce: Waters Xevo TQ-S v režimu MRM, negativní mód pro DHEAS, pozitivní pro ostatní analyty.

Hlavní výsledky a diskuse

• LLOQ: 0,12 nmol/l pro testosteron, 0,26 nmol/l pro androstenedion, 0,27 nmol/l pro 17-OHP a 0,17 µmol/l pro DHEAS (impreciznost < 8 %).
• Minimální iontová suprese díky efektivnímu online SPE – ověřeno chromatogramem a porovnáním s matrix blankem.
• Výborná shoda s tradičními metodami LLE a precipitací bílkovin (Passing-Bablok regrese ≈ identita).
• Redukce pracovní i strojního času, automatizace procesu a snížení spotřeby organických rozpouštědel.

Přínosy a praktické využití metody

• Simultánní stanovení čtyř klíčových steroidů z malého objemu séra (50 µl).
• Vysoká propustnost analýz (cca 5 min na vzorek) bez nutnosti derivatizace.
• Vhodné pro klinický výzkum, endokrinologii, farmakokinetiku a studie hormonálních profilů.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření panelu o další steroidní metabolity a konjugáty.
• Implementace HRMS či iontové mobility pro zvýšení selektivity a identifikace neznámých látek.
• Další miniaturizace a zautomatizování přípravy vzorků pro vyšší propustnost.

Závěr

Online SPE-UPLC-MS/MS metoda nabízí rychlý, citlivý a harmonizovaný přístup ke simultánnímu stanovení testosteronu, androstenedionu, 17-OHP a DHEAS v séru s významnými časovými i nákladovými úsporami a vynikající analytickou výkonností.