Analysis of Testosterone, Androstenedione, and Dehydroepiandrosterone Sulfate in Serum for Clinical Research

Význam tématu

Androgenické steroidy testosteron, androstenedion a DHEAS hrají klíčovou roli při regulaci pohlavních charakteristik a jejich přesné stanovení je zásadní pro klinický výzkum a diagnostiku endokrinních poruch.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout vysoce selektivní a citlivou metodu LC-MS/MS pro simultánní analýzu testosteronu, androstenedionu a DHEAS v séru s nízkým objemem vzorku a automatizací přípravy vzorků.

Použitá instrumentace

• Oasis PRiME HLB µElution Plate (Waters)
• ACQUITY UPLC I-Class System s HSS T3 VanGuard pre-column a HSS T3 column
• Xevo TQD hmotnostní spektrometr
• Tecan Freedom Evo 100/4 Liquid Handler
• MassLynx v4.1 s TargetLynx

Použitá metodika

Vzorky (100 µL séra) byly doplněny stabilně značenými interními standardy a extrahovány pomocí SPE na Oasis PRiME HLB desce. Proces byl zautomatizován na platformě Tecan. Separace probíhala v jednoranném gradientu s mobilní fází vodou a methanolem obohaceným o ammonium acetate a formát a detekce v režimu MRM s polaritou pozitivní/negativní.

Hlavní výsledky a diskuse

• Chromatografická selektivita zajistila oddělení steroidů od strukturou příbuzných interferencí a baseline rozlišení epimeru epitestosteron.
• Limity kvantifikace: 0,17 nmol/L (testosteron a androstenedion), 0,14 µmol/L (DHEAS) se S/N >10.
• Celková přesnost a opakovatelnost QC ≤6,3 % (n=30).
• Linearita nad rozsah 0,15–76 nmol/L pro testosteron, 0,15–74 nmol/L pro androstenedion a 0,13–58 µmol/L pro DHEAS (r2 >0,998).
• Matrix effect minimalizován s matrix faktorem kolem 1 (RSD <7 %).
• Porovnání s EQA metodou prokázalo střední bias +5,0 % (testosteron), –3,3 % (androstenedion) a –6,3 % (DHEAS).

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje rychlou a spolehlivou analýzu nízkých hladin steroidů při minimálním objemu vzorku, redukuje riziko chyb operátora díky automatizaci a nabízí vysoký průtok vzorků pro klinický výzkum.

Budoucí trendy a možnosti využití

Dalším směrem je rozšíření panelu steroidiálních profilů, hlubší integrace s laboratorními informačními systémy (LIMS), miniaturizace pracovních kroků a vývoj multiplexních metod pro komplexní endokrinní vyšetření.

Závěr

Vyvinutá LC-MS/MS metoda splňuje požadavky na citlivost, selektivitu a reprodukovatelnost pro klinický výzkum steroidů v séru a zefektivňuje laboratorní workflow.

Reference

• Foley D. a Calton L. A Clinical Research Method for the Analysis of Serum Testosterone and Androstenedione. Waters application note. 2015. p/n 720005274EN.