Clinical Research Method for the Fast, Efficient Analysis of Mycophenolic Acid Utilizing Online Solid-Phase Extraction in Conjunction with UPLC/MS/MS

Význam tématu

Stanovení mykofenolové kyseliny je klíčové pro monitorování imunosupresivní terapie po transplantacích. Přesné a citlivé měření hladin léku umožňuje optimalizaci dávkování, předcházení toxicitě a zajištění terapeutické účinnosti.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout a validovat plně automatizovanou metodu využívající online SPE (solid-phase extraction) integrovanou s UPLC/MS/MS pro rychlou, robustní a vysoce selektivní analýzu mykofenolové kyseliny v lidské plazmě.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky (50 µL plazmy) se zpracovávaly přidáním vnitřního standardu (d3-mykofenolová kyselina), denaturací, centrifugací a následným přímým podáním do autosampleru. Online SPE probíhala na zařízení Waters MassTrak Online SPE Analyzer s jednorázovými XBridge C18 cartridgemi. Chromatografie byla prováděna na ACQUITY UPLC HSS C18 SB kolonce (2.1×30 mm, 1.8 µm) s gradientem ammoniumacetátu a formiové kyseliny. Detekce probíhala na ACQUITY TQ detektoru v módu ESI+ a MRM.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda vykázala lineární rozsah 0,01–50 µg/mL (r2>0,996), LOD 2 ng/mL a LOQ 7 ng/mL. Intra-denní imprecize činila 9–10 %, mezidenní 5,8–8,4 %. Recoverie se pohybovaly mezi 92–116 %. Porovnání s konvenčním LC/MS/MS podle Demingovy regrese ukázalo bias 1 %. Nebyly zjištěny interferující signály od glucuronidů ani od dalších imunosupresiv. Ionizační suprese byla minimální a neovlivnila kvantifikaci.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda nabízí plnou automatizaci přípravy a analýzy vzorků, zvýšenou průchodnost (96 vzorků za ~5,5 h), eliminaci carry-over díky jednorázovým cartridgím a vysokou citlivost i selektivitu vhodnou pro klinickou praxi.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření přístupu na multiplexní stanovení více imunosupresiv, zdokonalení softwarové integrace, miniaturizace SPE formátů, aplikace v point-of-care zařízeních a nasazení strojového učení pro prediktivní farmakokinetiku a optimalizaci dávkování.

Závěr

Vyvinutá online SPE-UPLC/MS/MS metoda představuje rychlý, přesný a robustní nástroj pro klinické sledování mykofenolové kyseliny v plazmě, splňující požadavky na citlivost, selektivitu a vysokou průchodnost.

Reference

• Vogeser M, Zachoval R, Spöhrer U, Jacob K. Therapeutic drug monitoring. 2001;23(6):722–724.
• Tholen D, Kroll M, Astles JR, Caffo A, Happe T, Krouwer J, et al. Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures: CLSI EP-6A. 2003.
• McEnroe R, Burritt M, Powers D, Rheinheimer D, Wallace B. Interference Testing in Clinical Chemistry: CLSI EP07. 2005.