Use of Online SPE for Clinical Research in the Automated Analysis of Mycophenolic Acid by LC-MS

Význam tématu

Mykofenolátová kyselina (MPA) je klíčový imunosupresivní lék využívaný při transplantacích ledvin a v klinickém výzkumu je zásadní přesně a rychle sledovat její koncentrace v plazmě. Robustní a automatizované stanovení MPA umožňuje optimalizovat dávkování, snížit riziko odmítnutí orgánu a podpořit individualizovanou terapii.

Cíle a přehled studie

Hlavním cílem bylo vyvinout a ověřit plně integrovanou automatizovanou metodu spojující online SPE systém s vysokorychlostní kapalinovou chromatografií a tandemovou hmotnostní spektrometrií (LC-MS) pro stanovení MPA v plazmě. Studie porovnala nově navržený postup s existujícími výzkumnými metodami a hodnotila jeho analytickou výkonnost a reprodukovatelnost.

Použitá instrumentace

• LC-MS systém Xevo TQD
• Online SPE Manager ACQUITY UPLC
• MassTrak Online SPE Analyzer s cartridgí XBridge C18 OSM
• Kolona ACQUITY UPLC HSS SB C18 1.8 µm 2.1 × 30 mm

Použitá metodika

Vzorky plazmy (50 µl) byly denaturovány přídavkem deuterovaného interního standardu a zinkem síranem, poté odcentrifugovány. Supernatant se injektoval do online SPE systému, kde byla vzorková příprava plně automatizována – kondicionování, naložení, promytí a eluce na chromatografický sloupec. Mobilní fáze obsahovala 0.1 % kyseliny mravenčí v amonioacetátu ve vodě a methanolu. Gradientní eluce probíhala během 2.5 minuty; celý cyklus injekce až injekce trval 3 minuty.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda prokázala lineární odezvu v rozsahu 0.01 až 50 µg/ml (r2 > 0.999). LOD a LLOQ činily 2 ng/ml, resp. 7 ng/ml. Mezi-denní přesnost (CV) se pohybovala mezi 5.8 a 8.4 % pro úrovně QC vzorků. Chromatografie spolehlivě separovala MPA od glucuronidních metabolitů. Pro analýzu 96 vzorků byla potřebná doba přibližně 5.5 hodiny. Porovnání s rutinní LC-MS metodou prokázalo výbornou shodu (Demingova regrese y = 0.99 x – 0.01, bias 1 %).

Přínosy a praktické využití metody

Automatizace vzorkové přípravy šetří čas a zamezuje manuálním kročním chybám. Vysoká citlivost a selektivita LC-MS kombinovaná s online SPE minimalizuje iontovou potlačení a interferenci. Metoda je vhodná pro klinický výzkum a farmakokinetické studie MPA.

Budoucí trendy a možnosti využití

Možné rozšíření systému na další terapeuticky významné látky, plná integrace s laboratořními informačními systémy pro real-time monitoring a individualizovanou medicínu. Online SPE by mohl být adaptován pro panelová testování více imunosupresiv.

Závěr

Vyvinutá automatizovaná metoda online SPE spojená s LC-MS pro stanovení MPA představuje efektivní, citlivý a robustní postup pro klinický výzkum. Nabízí výrazné zrychlení analýzy, vysokou reprodukovatelnost a srovnatelnou přesnost s konvenčními postupy.