LC/MS, LC/MS/MS, LC/QQQ
ZaměřeníKlinická analýza
VýrobceWaters
Význam tématu
Analýza plazmatických metanephrinů je klíčová pro výzkum a diagnostiku neuroendokrinních onemocnění, jako je feochromocytom. Vysoce citlivní a simultánní stanovení metanephrinu, normetanephrinu a 3-methoxytyraminu zkracuje čas přípravy vzorků a zvyšuje spolehlivost výsledků.
Cíle a přehled studie / článku
Cílem bylo vyvinout a ověřit LC/MS metodu s online SPE pro současné měření tří biogenních aminů v plazmě s vysokou citlivostí a selektivitou vhodnou pro klinický výzkum.
Použitá metodika a instrumentace
Instrumentace:
- LC: ACQUITY UPLC s ACQUITY UPLC Online SPE Manager
- MS: Xevo TQ-S (triple quadrupole)
- Kolona: Atlantis HILIC, 2.1 × 50 mm, 3 µm
- SPE kazeta: MassTrak WCX OSM
- Ředění plazmy 1:1 s deuterovanými interními standardy
- Filtrace 10 kDa spin filtrem pro odstranění proteinů
- Automatická extrakce na online SPE (kondicionování, ekvilibrace, načtení, promytí, eluční flush)
- Mobilní fáze A: 100 mmol/l ammonium formiát pH 3,2
- Mobilní fáze B: acetonitril
- Gradient 0–8 min s postupným nárůstem % B pro efektivní separaci
Hlavní výsledky a diskuse
Metoda umožňuje oddělení 3-methoxytyraminu před metanephrinem a normetanephrinem, čímž eliminuje izobarické rušení a iontový crosstalk. Online SPE prokázala 100% recovery bez průsaků či adsorpce. Kalibrační křivky měly koeficient determinace r2 > 0,999. LLOQ jsou v rozmezí 0,0375–0,075 nmol/l, což zajišťuje měření i velmi nízkých koncentrací.
Přínosy a praktické využití metody
Metoda nabízí:
- Simultánní stanovení tří metanephrinů v jednom běhu
- Minimalizaci času na přípravu a manipulaci se vzorky
- Vysokou citlivost vhodnou pro výzkum i klinické studie
Budoucí trendy a možnosti využití
Očekává se integrace této metodiky do rutinních diagnostických sad, rozšíření panelu analyzovaných metabolitů, automatizace přípravy vzorků a využití vysoce rozlišovací MS pro širší metabolomické profily.
Závěr
Vyvinutá LC/MS metoda s online SPE je spolehlivá, citlivá a efektivní pro souběžné stanovení metanephrinu, normetanephrinu a 3-methoxytyraminu v plazmě. Umožňuje rychlou přípravu vzorků a přesné kvantifikace nízkých koncentrací.
Použitá instrumentace
- ACQUITY UPLC s ACQUITY UPLC Online SPE Manager
- Xevo TQ-S (triple quadrupole MS)
- Atlantis HILIC kolona 2.1 × 50 mm, 3 µm
- MassTrak WCX OSM kazeta
Obsah byl automaticky vytvořen z originálního PDF dokumentu pomocí AI a může obsahovat nepřesnosti.
