Determination of Beta-Blockers in Urine Using Supercritical Fluid Chromatography and Mass Spectrometry

Význam tématu

Polární farmaka jako beta-blokátory jsou v dopingové kontrole kritická pro zajištění integrity sportovních soutěží. Rychlá a citlivá detekce těchto sloučenin v biologických matricích umožňuje efektivní screening i potvrzovací testy.

Cíle a přehled studie / článku

Prezentovaná studie demonstruje využití superkritické fluidní chromatografie (SFC) v kombinaci s triple kvadrupólem hmotnostního spektrometru pro separaci a analýzu 13 beta-blokátorů. Hlavním cílem bylo vyhodnotit analytické parametry metody, zejména linearitu, limity detekce a kvantifikace, opakovatelnost retenčních časů a ploch píků.

Použitá metodika a instrumentace

Metoda využívá systém Agilent 1260 Infinity SFC spojený s Agilent 6460 Triple Quadrupole LC/MS. Mobilní fáze tvořilo superkritické CO₂ s modifikátorem methanolem obsahujícím 0,1 % kyseliny mravenčí. Separace probíhala na kolóně ZORBAX NH2 (4,6×150 mm, 5 µm) při 40 °C a tlaku 150 bar, průtok 3 mL/min s gradientem 2–50 % modifikátoru během 10 min. V MS režimu ESI pozitiv monitoroval specifické MRM přechody pro každý beta-blokátor.

Hlavní výsledky a diskuse

Beta-blokátory elutovaly v rozmezí 4,68–7,38 min. Limity detekce se pohybovaly pod 1,5 ng/mL, kvantifikace pod 5 ng/mL, lineární kalibrace vykazovala R² > 0,999. Reprodukovatelnost retenčních časů (RSD < 0,3 %) a ploch píků (RSD < 8 %) splnila nároky dopingové kontroly. Modelová analýza moči se 250 ng/mL penbutololu prokázala průměrnou koncentraci 228,5 ng/mL, s RSD 0,14 % pro retenční čas a 2,29 % pro oblast píků, a s přesností 91,4 %.

Přínosy a praktické využití metody

Díky vysoké propustnosti vzorků, krátkému době analýzy a nízkým detekčním limitům je navržená SFC-MS metoda vhodná k rychlému screeningu a přesnému kvantitativnímu stanovení beta-blokátorů v prostředí dopingové kontroly i průmyslové QA/QC.

Budoucí trendy a možnosti využití

Metodika SFC-MS má potenciál rozšířit se na další třídy polárních látek a integrovat se do plně automatizovaných pracovních postupů pro hromadné testování. Další vývoj cílí na minimalizaci spotřeby organických rozpouštědel a zlepšení ekologické udržitelnosti analytických protokolů.

Závěr

Popsaná SFC-MS platforma poskytuje rychlou, citlivou a opakovatelnou analýzu beta-blokátorů v moči, splňující přísné požadavky dopingové kontroly. Metoda je perspektivní pro nasazení v rutinní praxi i výzkumu.

Reference

1. The World Anti-Doping Code, The Prohibited List International Standard, World Anti-Doping Agency, 2015.
2. Mazzarino M. et al., Screening and confirmation analysis of stimulants, narcotics and beta-adrenic agents in human urine by hydrophobic interaction liquid chromatography coupled to mass spectrometry, Journal of Chromatography A, 1218 (2011), 8156–8167.