Simultaneous Analysis of Diuretics and Beta-Blockers by Mixed Mode SPE and UPLC-MS/MS for Anti-Doping Analysis

Význam tématu

Simultánní detekce diuretik a beta-blokátorů v moči má klíčový význam pro antidopingové laboratoře, protože tyto látky jsou na seznamu zakázaných látek WADA. Metoda, která dovolí analyzovat obě skupiny v jednom běhu, šetří čas, snižuje opotřebení přístrojů a zvyšuje efektivitu kontroly vzorků.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem bylo vyvinout rychlý a spolehlivý postup pro simultánní extrakci a stanovení zakázaných diuretik a beta-blokátorů v moči pomocí kombinace mixed-mode SPE a UPLC-MS/MS na jednom přístroji s rychlým přepínáním polarity.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky moči byly předčištěny a extrahovány pomocí Oasis MAX µElution desek postupem:

• ředění vzorku močového matrixu 1:1 s amoniakem
• nabití na µElution desku a promytí MeOH:Voda
• eluce formátem MeOH:ACN s formiátovou kyselinou

Následovala separace na ACQUITY UPLC I-Class a detekce Xevo TQ-S micro s rychlým přepínáním mezi ESI pozitivní a negativní režimem.

Použitá instrumentace

• Oasis MAX µElution plates
• Waters ACQUITY UPLC I-Class System
• Waters Xevo TQ-S micro Mass Spectrometer
• ACQUITY UPLC CSH C18 kolona (1.7 µm, 2.1×100 mm)

Hlavní výsledky a diskuse

Všechny analyty (24 pozitivně a 18 negativně ionizujících sloučenin) se elutovaly během 4 minut, celý cyklus byl 5 minut. Průměrné výtěžky extrakce β-blokátorů byly 85 % s RSD < 20 %, výtěžky diuretik 65–94 % s výjimkou acetazolamidu. Matriční efekty byly významně sníženy vůči jednoduchému ředění (iontové potlačení až o desítky procent nižší). Detekční limity dosáhly 20 % MRPL definované WADA a splnily požadavky na iontové poměry pro potvrzení přítomnosti.

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlý jednorázový běh s přepínáním polarity ušetří čas i náklady na údržbu
• Mixed-mode SPE minimalizuje matriční interferenci a zlepšuje přesnost
• Metoda splňuje přísné požadavky WADA na citlivost a potlačení pozadí

Budoucí trendy a možnosti využití

Možnost rozšíření na další třídy zakázaných látek s různou polaritou a ionizačními vlastnostmi, integrace do plně automatizovaných workflow a vysokokapacitní screening sportovních vzorků.

Závěr

Kombinace mixed-mode SPE na Oasis MAX µElution desce a vysokorychlostního UPLC-MS/MS s rychlým přepínáním polarity umožňuje efektivní, citlivou a rychlou analýzu diuretik a beta-blokátorů v jednom běhu. Metoda šetří zdroje, zkracuje dobu analýzy a splňuje požadavky WADA.

Reference

1. World Anti-Doping Agency WADA Prohibited List 2019
2. Musenga A a Cowan D Use of ultra-high pressure liquid chromatography… Journal of Chromatography A 1288 82–95 2013
3. Murray G a Danaceau J Simultaneous extraction and screening… Journal of Chromatography B 877(30) 3857–3864 2009
4. Deventer K Van Eenoo P Delbeke F Simultaneous determination… Rapid Communications in Mass Spectrometry 19(2) 90–98 2005
5. World Anti-Doping Agency WADA Technical Document TD2018MRPL 2018
6. World Anti-Doping Agency WADA Technical Document TD2015ICR 2015