Quantitative Determination of Drugs Using Supercritical Fluid Chromatography with Triple Quadrupole Mass Spectrometry

Význam tématu

Superkritická fluidní chromatografie (SFC) v kombinaci s triple kvadrupólovou hmotnostní spektrometrií představuje rychlou a citlivou metodiku pro multifrakční screening a kvantitativní stanovení široké škály forenzně relevantních látek.

Cíle a přehled studie / článku

Studie si klade za cíl vyvinout a optimalizovat jeden chromatografický běh pro separaci a kvantifikaci 25 analytů z různých skupin (amfetaminy, benzodiazepiny, opiáty, THC aj.), dosáhnout limitu detekce okolo 30 pg/mL, vysoké linearity, přesnosti a reprodukovatelnosti a aplikovat metodu na spiked vzorek moči.

Použitá metodika a instrumentace

Agilent 1260 Infinity Analytical SFC System propojený s Agilent 6460 Triple Quadrupole LC/MS s Agilent Jet Stream:

• Kolona ZORBAX SB-C8 (4,6×100 mm, 1,8 µm)
• Mobilní fáze CO2 s modifikátorem methanol + 0,2 % kyseliny mravenčí + 10 mM formiátu amonného; gradient 2–25 % methanolu za 5 min; průtok 2 mL/min; teplota kolony a BPR 60 °C; tlak 200 bar
• Make-up tok methanol/voda (95/5) + 0,2 % formiové kyseliny při 0,3 mL/min
• MS v pozitivním ESI, DMRM režim s optimalizovanými MRM přechody
• Injekční objem 1 µL (loop overfill)
• Příprava vzorku: moč nasycená testovací směsí 100 ng/mL, ředěná 1:5, centrifugace a filtrace

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda umožnila separaci všech 25 látek během 5 minut s retenčními časy od ~1,0 do 4,1 minuty. Retenční čas RSD < 0,3 % a plošný RSD < 4 %. Limity detekce < 30 pg/mL, LOQ < 100 pg/mL při lineární odezvě R2 > 0,993. Repetační měření 10 ng/mL kalibrátoru vykázalo přesnost (RSD) < 3,5 % a accuracy 95–112 %. Analýza spiked moči (20 ng/mL amfetaminů) dosáhla RSD < 3 % a recovery 82–101 %.

Přínosy a praktické využití metody

SFC-QQQ MS poskytuje rychlou analýzu širokého spektra forenzních látek s minimální přípravou vzorku, vynikající citlivostí a selektivitou. Vhodné pro rutinní provoz v toxikologii, dopingové kontrole, postmortální forenzní analýze a průmyslové QC.

Budoucí trendy a možnosti využití

Rozšíření metody o další drogy a metabolity, integrace se systémy vysokého rozlišení (HRMS), vyšší míra automatizace přípravy a pokročilá datová analýza pro komplexní forenzní screening.

Závěr

Vyvinutá SFC-QQQ MS metodika poskytuje robustní, rychlé a citlivé řešení pro kvantitativní screening širokého spektra psychoaktivních látek v biologických maticích s vynikajícími analytickými parametry.

Reference

Stone P. J. W. An Application Kit for the Screening of Samples for Analytes of Forensic and Toxicological Interest using LC/QQQ MS/MS with a Dynamic MRM Transition Database, Agilent Technologies application note 5990-4254EN, 2016.