Determination of Vitamin E in Olive Oil Using the Agilent 1260 Infinity Analytical SFC System

Význam tématu

Analýza vitamínu E v olivovém oleji je klíčová pro hodnocení jeho kvality, autentičnosti a nutriční hodnoty. Tocopheroly a tocotrienoly vykazují významný antioxidační účinek a ovlivňují stabilitu i zdravotní přínosy oleje. Tradiční normal-phase LC metody jsou časově náročné a využívají toxické organické rozpouštědlo. Superkritická fluidní chromatografie (SFC) nabízí rychlejší a ekologičtější alternativu s vysokým rozlišením.

Cíle a přehled studie

Cílem prezentované studie bylo demonstrovat separaci všech osmi isomerů vitamínu E (a, b, g, d-tocopherol a a, b, g, d-tocotrienol) na systému Agilent 1260 Infinity Analytical SFC. Byla vybudována kalibrační křivka šesti úrovní, určeny limity detekce (LOD) a kvantifikace (LOQ) a změřena reálná vzorka panenského olivového oleje pro stanovení skutečného obsahu vitamínu E.

Použitá metodika a instrumentace

Pro separaci byla použita kolona Agilent ZORBAX NH2 (4,6 × 150 mm, 5 µm). Metoda SFC probíhala při teplotě kolony 50 °C a tlaku 210 bar. Mobilní fáze sestávala z CO₂ (solvent A) a ethanolu (solvent B) při průtoku 4,5 mL/min s gradientem 3 % až 4,5 % ethanolu během 6 minut. Detekce probíhala pomocí DAD při 295 nm. Vzorky se připravovaly ředěním v hexanu (100 mg/mL) a objem injekce byl 5 µL.

• Agilent 1260 Infinity SFC Control Module
• Agilent 1260 Infinity SFC Binary Pump
• Agilent 1260 Infinity High-Performance Degasser
• Agilent 1260 Infinity Standard Autosampler
• Agilent 1260 Infinity Diode Array Detector (DAD) s vysokotlakou cely
• Agilent 1290 Infinity Thermostatted Column Compartment (TCC)

Hlavní výsledky a diskuse

Za pouhých 6 minút byla dosažena baseline separace osmi isomerů vitamínu E. LOQ se pohybovaly pod 23 µg/mL a LOD pod 7 µg/mL. Linearita kalibrací byla vynikající s koeficientem R² > 0,999 u všech sloučenin. RSD retence činilo ≤ 0,3 % a RSD ploch ≤ 6 %, přičemž vyšší variabilita ploch byla přisuzována možné degradaci či adsorpci vitamínů na kovových částech přístroje. V analyzovaném olivovém oleji byl a-tocopherol stanoven na 184,8 mg/kg a g-tocopherol byl detekován pouze jako stopa.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda nabízí výrazné zrychlení analýzy (pětinásobné proti NP-LC), nižší spotřebu organických rozpouštědel a vynikající přesnost. Výsledky jsou reprodukovatelné a dostatečně citlivé pro kontrolu kvality, certifikaci a sledování stárnutí či kontaminace olivových olejů v potravinářských laboratořích.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další rozvoj SFC metodiky může zahrnovat hyphenaci s hmotnostní spektrometrií pro potvrzování struktury vitamínů, využití zelenějších modifikátorů, miniaturizaci systému nebo rozšíření na další lipofilní vitamíny a bioaktivní látky. Automatizace přípravy vzorků a online monitoring stability olejů představují perspektivní směry pro potravinovou analytiku.

Závěr

Agilent 1260 Infinity Analytical SFC System se ukázal jako rychlý, citlivý a ekologický nástroj pro stanovení všech osmi isomerů vitamínu E v olivovém oleji. Metoda splňuje klíčové požadavky na rychlost, přesnost, linearitu i nízkou spotřebu rozpouštědel, což ji činí vhodnou pro rutinní použití v potravinářských a výzkumných laboratořích.

Reference

1. Owen, et al. Phenolic compounds and squalene in olive oils: The concentration and antioxidant potential of total phenols, simple phenols, secoiridoids, lignans and squalene. Food Chem. Toxicol. 2000, 38, 647–659.
2. Cunha, et al. Quantification of Tocopherols and Tocotrienols in Portuguese olive oils using HPLC with three different detection systems. J. Agric. Food Chem. 2006, 54, 3351–3356.
3. Aparicio, R.; Aparicio-Ruíz, R. Authentication of vegetable oils by chromatographic techniques. J. Chromatogr. A 2000, 881, 93–104.
4. Cort, et al. Stability of Alpha- and Gamma-Tocopherol: Fe3+ and Cu2+ Interactions. J. Food Sci. 1978, 43, 797–798.