An Application Kit for the Screening of Samples for Analytes of Forensic Toxicological Interest using LC/QQQ MS/MS with a Dynamic MRM Transition Database

Význam tématu

Forenzní toxikologie často vyžaduje detekci stovek potenciálně přítomných látek v náročných matricích s nízkými koncentracemi. Efektivní screeningové metody založené na LC-MS/MS s dynamickým MRM (dMRM) umožňují zkrátit dobu vývoje metody, zvýšit kvalitu dat a rozšířit počet sledovaných přechodů bez ztráty citlivosti.

Cíle a přehled studie

Cílem aplikace bylo vyvinout a otestovat kompletní sadu metod a databázi optimalizovaných MRM přechodů pro přibližně 200 forenzních analytů na platformě Agilent 6400 Series QQQ LC/MS. Studie demonstruje rychlý start analýzy pomocí dodávaného testovacího mixu a vyhodnocuje detekční limity a linearitu kalibrace pro reprezentativní panel 25 sloučenin.

Použitá metodika a instrumentace

Metoda kombinuje chromatografii na Zorbax Eclipse Plus C18 (2.1×100 mm, 1.8 μm) s gradientním elucí ve 0,5 mL/min a detekci na Agilent 6460 QQQ LC/MS s technologií Jet Stream ESI. Dynamické MRMs přepínají přechody v definovaných retenčních oknech, čímž se maximalizuje doba sběru dat pro jednotlivé analyty. Vyhodnocení dat probíhá v softwaru MassHunter s automatickou optimalizací fragmentačních podmínek.

Hlavní výsledky a diskuse

• Testovací mix (1 μg/mL) diluovaný na série koncentrací 10–50 000 fg on-column pro 25 látek.
• Detekční limity v rozmezí 5–250 fg on-column se shodou R² kalibrace >0,99 pro většinu sloučenin.
• Dynamické MRM umožnilo zkrácení cyklu přechodů a zvýšení dwell time bez ztráty rozlišení chromatografických píků.

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlý náběh metody díky přednastavené databázi a testovacímu mixu.
• Široké pokrytí kontrolovaných látek a drog zneužívaných ve forenzní praxi.
• Sjednocení screeningových a kvantitativních aplikací v jediné metodě.
• Možnost přidání vlastních MRM přechodů a reoptimalizace pro specifické instrumentální podmínky.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další rozšíření databází přechodů zahrnujících metabolity a nové syntetické drogy. Integrace automatizace přípravy vzorků, strojového učení pro vyhodnocování dat a nasazení ve vysoce průtokových laboratořích pro rychlý forenzní screening ve velkém měřítku.

Závěr

Agilent Forensics and Toxicology Dynamic MRM Database Kit poskytuje robustní řešení pro komplexní forenzní screening a kvantifikaci až 200 analytů. Dynamické řízení přechodů zajišťuje vysokou citlivost, kvalitu dat a flexibilitu metody, což výrazně zkracuje čas vývoje a validace.

Reference

1. Stone PJW: New Dynamic MRM Mode Improves Data Quality and Triple Quad Quantification in Complex Analyses. Agilent application note 5990-3595EN, 2014.
2. Agilent Technologies: G1734AA MassHunter Forensics and Toxicology Dynamic MRM Database Kit Quick Start Guide. Publication 5990-4265EN, 2016.