Agilent G1734AA MassHunter Forensic Toxicology Dynamic MRM Database Kit

Význam tématu

Forenzní toxikologie vyžaduje rychlé a spolehlivé stanovení širokého spektra analyzovaných sloučenin ve stopových koncentracích v biologických vzorcích. V praxi je nezbytné minimalizovat dobu vývoje metody, zajistit vysokou citlivost a reprodukovatelnost výsledků. Využití Dynamic MRM technologie umožňuje optimalizované datové sbírání pouze v časových oknech retenčních časů cílových látek, čímž se zvyšuje počet analyzovatelných přechodů v jediné LC/MS analýze a udržuje vysoká kvalita dat.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem popsané Sady MassHunter Forensic Toxicology Dynamic MRM Database bylo poskytnout uživatelům předdefinované MRM přechody pro 200 forenzních toxikologických analytů včetně optimalizovaných fragmentačních podmínek (fragmentor, kolizní energie) a využít dynamického řízení sběru dat (Dynamic MRM). Studie ukazuje proces instalace, přípravu testovací směsi, verifikaci metod a postup tvorby vlastní dynamické MRM metody na stratifikované sadě standardů.

Použitá instrumentace

• Agilent 1200 Series LC (Binary Pump SL, Column Compartment, Wellplate Sampler SL+)
• Agilent 6400 Series Triple Quadrupole LC/MS
• ZORBAX Eclipse Plus C18 kolona (2.1×100 mm, 1.8 µm, p/n 959764-902)
• Software MassHunter Data Acquisition, Quantitative Analysis, Qualitative Analysis, Optimizer
• Reagencie: acetonitril a voda LC/MS kvality, formic acid, amonium formát LC/MS kvality

Použitá metodika

Postup je rozdělen do několika fází:

• Instalace softwaru a databáze Dynamic MRM
• Verifikace LC/MS systému a příprava chromatografických podmínek (gradient 5 mM amonium formátu s 0,01 % formic acid / acetonitril s 0,01 % formic acid)
• Příprava a analýza test mixu 25 komponent (10 ppb), kontrola ladění (Checktune/Autotune)
• Zpracování dat v Qualitative Analysis, extrakce MRM chromatogramů s integrací
• Import MRM přechodů z databáze do Metody Data Acquisition (statický MRM režim)
• Spuštění série standardů v podskupinách do 50 komponent pro určení retenčních časů
• Generování reportů s retenčními časy a segmenty pomocí šablony DMRM Method Generator
• Sestavení konečné Dynamic MRM metody v Data Acquisition aplikaci (vložení segmentů a nastavení cyklu)
• Konfigurace pumpy Binary Pump SL v režimu bypass (demper a mixer vyřazeny)

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda test mixu prokázala reprodukovatelné retenční časy v rámci 0,4 min okna a citlivost na úrovni 10 ppb pro 25 reprezentativních toxikologických analytů. Dynamic MRM sběr umožnil zvýšení počtu sledovaných přechodů bez kompromisu kvality signálu. Segmentace dat sběru odpovídala retenčním časům a adaptivně prodlužovala dwell time ve vymezených intervalech, což vedlo ke stabilnímu poměru signál/šum a lepší kvantifikaci.

Přínosy a praktické využití metody

Implementace Dynamic MRM databáze zkracuje rozsáhlou přípravu metod, standardizuje přechodové a parametrizační podmínky a umožňuje rychlý screening velkého počtu analytů. V forenzních, toxikologických a QA/QC laboratořích metoda zkracuje dobu vývoje, zvyšuje flexibilitu a usnadňuje validaci díky vestavěným kontrolám retenčních časů a interním standardům.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření databází o nové toxikologické, léčivé a dopingové látky
• Integrace s vysokorychlostními HRMS technologiemi a neznámou screeningovou analýzou
• Automatizace přípravy vzorků a zpracování dat pomocí pokročilých algoritmů a umělé inteligence
• Využití parametrických adaptivních časových oken pro optimalizaci cyklu a další zvýšení citlivosti
• Plná integrace do laboratorních informačních systémů (LIMS)

Závěr

Sada MassHunter Forensic Toxicology Dynamic MRM Database nabízí kompaktní řešení pro rychlou tvorbu a provádění vysoce selektivních a citlivých LC/MS metod v forenzní toxikologii. Díky přednastaveným přechodům, optimalizovaným paramétrům a dynamickému řízení sběru dat lze efektivně analyzovat stovky analytů v jediné běhu.

Reference

• Agilent Technologies. MassHunter Forensic Toxicology Dynamic MRM Database Kit Quick Start Guide, p/n 5990-4265EN, 2009.
• Agilent Technologies. Technical Note: Dynamic MRM, p/n 5990-3595EN.