Simultaneous Quantitative Analysis of Five Vitamers of B3 and B6 in Banana by LC/MS/MS

Význam tématu

Vitamíny B3 (nikotinová kyselina, nikotinamid) a B6 (pyridoxamin, pyridoxal, pyridoxin) jsou nezbytné pro energetický metabolismus, funkci nervového systému a pleť. Banány představují bohatý zdroj těchto vitamínů. Precizní a rychlá analýza vitamérů v potravinách je klíčová pro nutriční složení, výzkum a kontrolu kvality.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout citlivou LC-MS/MS metodu pro simultánní kvantifikaci pěti vitamérů B3 a B6 v banánech. Metoda kombinuje acidovou hydrolýzu vzorku a MRM analýzu na přístroji Shimadzu LCMS-8045.

Použitá instrumentace

Shimadzu LCMS-8045 s ESI Heated Interface v pozitivním módu
Chromatografická kolona Shim-pack GIST C18-AQ (100×2.1 mm, 3 µm)
Mobilní fáze A: 20 mM amonný formiát ve vodě s 0.1% kyselinou formiovou; B: methanol
Gradientní eluce s časovým programem (0–0.5 min B 0%, 0.5–3.0 min B 30%, 3.1–4.5 min B 90%, 4.6–8.0 min B 0%)

Metodika

Homogenizovaná banánová hmota extrahovaná 0.1M HCl, autoklávována při 121 °C po dobu 30 minut, odstředěna (10 000 rpm, 20 min) a filtrována (0.22 µm).
Zásobní roztoky vitamérů (1000 ppm) a interní standard nikotinamid-d4 připraveny v Milli-Q vodě a methanolu. Pracovní standardy 0.5–50 ppb s interním standardem 10 ppb.
Detection MRM: dvě transice pro každý vitamér (kvantifikační a potvrzovací iont).

Hlavní výsledky a diskuse

Kalibrační interval 0.5–50 ppb vykázal linearitu R² > 0.9995. LOQ 0.2–0.6 ppb, LOD 0.07–0.2 ppb. Opakovatelnost (n=6) RSD 0.44–2.10 %. Recovery v banánovém matrixu 62–104 %, matrix efekt 54.9–119.3 %.
Analýza tří komerčních banánů ukázala obsah v mg/100 g: nikotinová kyselina 0.104–0.113, nikotinamid 0.427–0.458, pyridoxamin 0.213–0.241, pyridoxal 0.023–0.026, pyridoxin 0.090–0.103.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje simultánní stanovení pěti vitamérů v jediném běhu, čímž šetří čas a snižuje náklady. Vysoká citlivost a selektivita podporují aplikaci v potravinářském průmyslu, QA/QC laboratořích a nutričním výzkumu.

Budoucí trendy a možnosti využití

Rozšíření na další vitamíny a biologické matrixy (plazma, doplňky stravy).
Automatizace a vysokokapacitní screening vzorků.
Použití nativních izotopových standardů pro kompenzaci matrix efektu a zvýšení přesnosti.

Závěr

Vyvinutá LC-MS/MS metoda pro simultánní kvantifikaci vitamérů B3 a B6 je rychlá, citlivá a reprodukovatelná. Nabízí spolehlivé stanovení v potravinových vzorcích s vynikající linearitou, nízkými LOD/LOQ a dobrou opakovatelností.

Reference

1. Amaro C., Flores C., Dias M., Lidon F. Pyridoxine analysis by high performance liquid chromatography and validation in fortified milk powder. Acta Alimentaria. 2014;43:297–305.
2. Kall M. A. Determination of total vitamin B6 in foods by isocratic HPLC: a comparison with microbiological analysis. Food Chemistry. 2003;82:315–327.