LC-MS/MS Method for Sensitive Detection and Quantitation of 8 Water-Soluble vitamins in Infant Milk Powder

Význam tématu

Voda rozpustné vitaminy skupiny B jsou klíčové pro správný růst a vývoj kojenců. Přesná a citlivá stanovení těchto vitaminů v potravinách pro děti jsou nutná pro zajištění shody s doporučenými denními dávkami a kvalitu výživových přípravků.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout rychlou a vysoce citlivou LC-MS/MS metodu pro simultánní kvantifikaci osmi vitaminů B ve vzorcích pro kojence. Metoda zahrnuje jednoduchou extrakci z prášku kojeneckého mléka a použití pěti izotopově značených vnitřních standardů pro kompenzaci matrix efektu a zvýšení přesnosti.

Použitá metodika

Pro přípravu vzorku bylo použití následujícího postupu:

• 1 g vzorku kojeneckého mléka bylo extrahováno 10 mL vody, promícháno a poté doplněno 30 mL 1 % roztoku octové kyseliny
• Vzorek se centrifugoval a supernatant filtrací 0,22 μm nylonovým filtrem
• Filtrát se naředil pětkrát vodou a injektovalo se 2 μL do LC

Chromatografie probíhala na kolonce Shim-pack GIST C18-AQ (2,1×50 mm, 1,9 μm) při teplotě 40 °C s gradientem mobilní fáze (5 mmol/l amonný acetát + 0,1 % kyselinu mravenčí ve vodě vs. methanol, průtok 0,3 mL/min). Detekce probíhala v režimu pozitivní ESI-MRM na přístroji Shimadzu LCMS-8060.

Použitá instrumentace

• LC-MS/MS Shimadzu LCMS-8060 s heated ESI rozhraním
• Shimadzu Shim-pack GIST C18-AQ kolonka 2,1×50 mm, 1,9 μm

Hlavní výsledky a diskuse

Lineární kalibrace osmi vitaminů vykázala koeficienty korelace r2 > 0,999 v rozsahu 10–750 ng/mL. Limity detekce ležely mezi 0,08–1,36 ng/mL a limity kvantifikace mezi 0,23–4,13 ng/mL. Opakovatelnost (n=6) dosáhla RSD pod 4 %. Recoveries testované v prášku kojeneckého mléka se pohybovaly mezi 90,1 % a 113,6 %. Kvantifikace v referenčním materiálu NIST 1849a potvrdila správnost hodnot v deklarovaných mezích.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda nabízí vysokou citlivost, reprodukovatelnost a rychlost rozběhu analýzy (12 minut na běh). Použití izotopově značených standardů minimalizuje vliv složité matrice kojeneckých prášků a zaručuje spolehlivé výsledky vhodné pro QA/QC a výzkumné účely v potravinářství.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření panelu analytů o další vitaminy a bioaktivní sloučeniny
• Automatizace přípravy vzorků a vysokoprůtočné platformy
• Integrace s vysoce rozlišovacími hmotnostními spektrometry pro strukturální analýzu
• Miniaturizace a ambientní ionizační techniky pro přímou analýzu

Závěr

Vyvinutá LC-MS/MS metoda pro osm vody rozpustných vitaminů skupiny B poskytuje vynikající citlivost, robustnost a přesnost díky jednoduchému extrakčnímu postupu a izotopově značeným standardům. Metoda je vhodná pro rutinní kontrolu kvality kojeneckých výživ.

Reference

• Cellar NA, McClure SC, Salvati LM, Reddy TM. Anal Chim Acta. 2016;934:180–185.
• Goldschmidt RJ, Wolf WR. Anal Bioanal Chem. 2010;397(2):471–481.