ULTRA-LOW LEVEL ANALYSIS OF ALDOSTERONE IN PLASMA USING THE XEVO TQ-XS FOR CLINICAL RESEARCH

Význam tématu

Aldosteron je klíčový mineralkortikoid zodpovědný za regulaci rovnováhy sodíku, draslíku a krevního tlaku. Jeho spolehlivá a citlivá kvantifikace v plazmě je nezbytná pro klinický výzkum k pochopení patofyziologie hypertenze, srdečních a renálních onemocnění.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem bylo vyvinout a validovat rychlou a vysoce citlivou metodu UPLC-MS/MS pro stanovení aldosteronu v lidské plazmě při ultra nízkých koncentracích (pmol/L) s minimálním vzorkem o objemu 200 µL. Studie zahrnovala hodnocení linearity, citlivosti, přesnosti, preciznosti, matričních efektů a porovnání s výsledky externího hodnocení kvality (EQA).

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky plazmy a proužkované séra byly připraveny přidáním vnitřního standardu, precipitací pomocí síranu zinečnatého v metanolu a vody a následným centrifugováním. Supernatant byl zpracován pomocí Oasis MAX µElution destičky na automatickém systemu Tecan Freedom Evo 100. Chromatografie probíhala na systému Waters ACQUITY UPLC I-Class s CORTECS C18 kolonkou a VanGuard prekolonkou při gradientu metanol–0,05 mM fluoridu amonného. Detekce byla realizována na mase selektivním detektoru Waters Xevo TQ-XS v režimu ESI negativního iontu a Multiple Reaction Monitoring (m/z 359,3 > 189,2 pro aldosteron a m/z 363,3 > 190,2 pro vnitřní standard). Doba analýzy jednoho vzorku byla 4,3 minuty.

Hlavní výsledky a diskuse

• Lineárnost byla pro rozsah 8–4 162 pmol/L vynikající s r2 > 0,995.
• Nižší detekční koncentrace byla pro plazmu stanovena na 3,3 pmol/L (S/N > 10).
• Neprokázal se významný carryover mezi vzorky.
• Matriční faktor pro aldosteron byl v průměru 1,01 se směrodatnou odchylkou 5,2 %, což dokládá účinnou kompenzaci iontového potlačení vnitřním standardem.
• Celková preciznost metody (n = 5) byla ≤ 6,3 % a opakovatelnost ≤ 6,0 % při nízkých, středních a vysokých koncentracích (36, 286, 2 932 pmol/L).
• Demingova regrese oproti EQA referenčním hodnotám vykázala sklon 0,99 a konstantní bias –2,31, Altman-Blandova analýza potvrdila střední bias +5,6 %.

Přínosy a praktické využití metody

Tato validovaná UPLC-MS/MS metoda nabízí vysoce citlivé a reprodukovatelné stanovení aldosteronu v plazmě s nízkým objemem vzorku a krátkým časem analýzy, což je vhodné pro klinické studie, farmakokinetiku a rutinní výzkumné laboratoře.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Další automatizace a miniaturizace přípravy vzorku pro vyšší průtok vzorků.
• Rozšíření metody na současné stanovení více kortikosteroidů v jedné analýze.
• Integrace datové analýzy a bioinformatiky pro pokročilou interpretaci hormonálních profilů.
• Standardizace postupů mezi laboratořemi a validace pro diagnostické použití.

Závěr

Vyvinutá metoda kombinuje offline automatizované přípravy vzorku, vysoce účinnou chromatografii a citlivou detekci na Xevo TQ-XS. Splňuje náročné požadavky na linearitu, citlivost, preciznost a přesnost a je významným nástrojem pro výzkum aldosteronu v klinickém prostředí.

Reference

• Ultra-low level analysis of aldosterone in plasma using the Xevo TQ-XS for clinical research, Waters Corporation, 2019.