A COMBINED LC-MS/MS METHOD FOR THE ANALYSIS OF ALDOSTERONE AND PLASMA RENIN ACTIVITY FOR CLINICAL RESEARCH USING THE XEVO TQ ABSOLUTE MASS SPECTROMETER

Význam tématu

Renin-Angiotensin-Aldosteronový systém (RAAS) je klíčový pro regulaci krevního tlaku a objemu krve. Aldosteron zvyšuje zadržování sodíku a vody, zatímco renin-angiotensinová kaskáda ovlivňuje cévní tonus. Monitorování aldosteronu a aktivity plazmatického reninu (PRA) je nezbytné při hodnocení farmakologických intervencí a nových léčebných postupů v klinickém výzkumu.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem projektu bylo vyvinout a validovat jednoprotokolovou LC-MS/MS metodu pro současné stanovení aldosteronu a PRA v malém objemu plazmy (125 µl) pomocí spektrometru Xevo TQ Absolute. Metoda má nahradit samostatné analýzy, zkrátit čas, snížit náklady a zvýšit informativní hodnotu dat.

Použitá metodika

Vzorky plazmy se nejprve rychle rozmrazily, přidala se generace pufru pro inkubaci při 37 °C po dobu 3 hodin k převodu proreninu na aktivní renin. Následně byly přidány vnitřní standardy, vzorek ošetřen amoniakem a aplikován na Oasis MAX µElution 96-well SPE desku. V mytí se použil amoniak v methanolu, eluce proběhla dvoufázově: 30 % acetonitrilu pro aldosteron a 0,5 % kyseliny mravenčí v 5 % acetonitrilu pro angiotensin I. Eluáty se promíchaly, odstředily a injektovaly do UPLC.

Použitá instrumentace

• Xevo TQ Absolute Mass Spectrometer (Waters)
• ACQUITY UPLC I-Class FL (Waters)
• XBridge Premier BEH C18 kolona (Waters)
• Oasis MAX 96-well µElution SPE deska (Waters)

Hlavní výsledky a diskuse

• Funkční citlivost: S/N > 10:1 pro 28 pmol/L aldosteronu a 0,08 nmol/L/h PRA s přesností < 20 % (n=30).
• Precision QC: opakovatelnost a reprodukovatelnost ≤ 7,5 % CV pro aldosteron i PRA napříč různými kontrolami.
• EQA: analýza 39 externě kontrolovaných vzorků aldosteronu ukázala Demingův fit y=0,93x+2,14 a bias −6,1 % vůči průměru LC-MS schématu.
• Metoda vs. oddělené LC-MS/MS: Passing-Bablokova regrese pro 58 vzorků aldosteronu y=0,96x−2,49 a bias −6,0 %, pro PRA obdobná shoda.

Přínosy a praktické využití metody

Jednoprotokolová analýza šetří čas a materiál, umožňuje simultánní stanovení dvou klíčových parametrů RAAS v jediném běhu za pouhých 3,2 minuty. Vysoká citlivost a reprodukovatelnost podporují použití ve farmakokinetických a farmakodynamických studiích a při validaci nových terapeutik.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další kroky zahrnují rozšíření multiplexních metod o dodatečné biomarkery RAAS, integraci automatizovaných zařízení pro vysokopropustné analýzy a standardizaci mezi laboratořemi. V dlouhodobém horizontu lze zamýšlet implementaci do klinických diagnostických protokolů a rozvoj point-of-care testů.

Závěr

Popsaná metoda umožňuje rychlé, spolehlivé a citlivé stanovení aldosteronu a PRA z malého objemu plazmy. Výsledky validace ukazují vynikající shodu s externími schématy a nezávislými metodami, což potvrzuje vhodnost metody pro klinický výzkum.

Reference

• Foley D., Wardle R., Calton L.J. A combined LC-MS/MS method for the analysis of aldosterone and plasma renin activity for clinical research using the Xevo TQ Absolute Mass Spectrometer, Waters Corporation, 2023.